直播与移栽当归药材质量的比较研究

发布时间：2020-08-14 18:20

【摘要】：当归是临床常用中药材,是大宗出口中药品种,但其在实际生产中存在严重的抽薹问题,而当归直播技术成为解决此问题的重要途径之一。有关直播当归质量的相关研究几乎为零,更未对直播与移栽当归的品质做深入的比较研究。因此,本文从当归的产量、外观性状、化学成分及药理作用方面对直播与移栽当归的质量进行比较研究,主要从以下几个方面展开研究:一、直播与移栽当归的产量及外观性状的比较研究采用常规方法称得当归鲜重,结果表明:直播当归药材产量为1576.5 kg/亩,移栽当归药材为679.78 kg/亩,直播当归的亩产量较移栽当归增加896.72 kg/亩,增加幅度达2倍。直播与移栽当归的外观都略呈圆柱形,且下部有支根,外表面都具纵皱纹和横长皮孔样的突起,香气浓郁,味甘、辛、微苦。总体上,直播与移栽当归药材的外观性状差异较小,直播当归药材的个头较移栽当归小,单株重量也有所降低,可能是由于直播当归生长年限较短(一年生)的原因,但由于单位种植面积上有足够的株数,故能保证直播当归的亩产量,甚至较移栽当归高,直播当归虽主根较短,但侧根数少,较为符合当归“直根系植物”的特点。二、直播与移栽当归中药典指标成分及其他成分的比较研究按2015版中国药典规定的方法测定直播与移栽当归中总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及挥发油的含量,采用70%甲醇水超声提取,并采用HPLC法测定阿魏酸的含量。结果:直播当归总灰分含量在4.39%~5.06%之间,平均含量4.85%;酸不溶性灰分含量在0.42%~0.56%之间,平均含量0.48%;醇溶性浸出物含量在62.90%~64.80%之间,平均含量为63.93%;挥发油含量在0.53%~0.65%之间,平均含量0.57%;阿魏酸的平均含量为0.54 mg/g;移栽当归总灰分含量在5.32%~5.46%之间,平均含量5.40%,酸不溶性灰分含量在0.58%~0.67%之间,平均含量为0.62%,醇溶性浸出物含量在59.66%~60.94%之间,平均含量60.41%;挥发油含量在0.43%~0.46%之间,平均含量0.44%;阿魏酸的平均含量为1.34 mg/g,均符合药典要求,除阿魏酸,直播当归的其他指标均优于移栽当归。同阿魏酸的测定方法一样,采用HPLC法测定当归中的Z-藁本内酯、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的含量;并采用0.1 mol/L盐酸提取当归中的氨基酸,经异硫氰酸苯酯衍生后,HPLC法检测氨基酸的含量;然后采用紫外可见分光光度计测定直播与移栽当归中多糖的含量,采用GC-MS检测当归挥发油中的化学成分,结合NIST库和保留指数定性定量。结果:(1)直播当归中Z-藁本内酯、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的平均含量分别为22.12 mg/g,0.2791 mg/g,0.0275 mg/g,移栽当归中相应成分的平均含量分别为17.53mg/g,0.2869 mg/g,0.0248 mg/g。除正丁基苯酞,其他2种成分的含量在直播当归中较高。(2)除甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸及异亮氨酸的含量在直播当归较高,其他已检测到的11种氨基酸的含量均较移栽当归低。(3)直播当归中多糖的平均含量为0.466 mg/mL,而移栽当归中的含量为0.376 mg/mL,较直播当归低。(4)直播当归挥发油中正丁烯基苯酞的相对含量为5.93%,较移栽当归(相对含量为4.31%)高出1.62%,Z-藁本内酯的相对含量为72.38%,较移栽当归(相对含量为60.95%)高出11.43%,而其他成分如(1S)-(-)-α-蒎稀、β-蒎稀、β-罗勒稀、(E)-β-法呢烯、6-十一酮等的相对含量则较低。因此,正丁烯基苯酞和Z-藁本内酯可能是影响直播当归与移栽当归挥发油质量差异的主要原因。三、直播与移栽当归质量综合评价比较采用熵权TOPSIS法综合评价直播与移栽当归药材的质量,结果表明:移栽当归排前5名,直播当归排后5名。并利用SPSS软件分析直播与移栽当归中各指标成分的差异,结果发现,直播与移栽当归中浸出物、挥发油、阿魏酸及Z-藁本内酯的含量呈极显著差异,总灰分和酸不溶性灰分的含量呈显著性差异,而多糖、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的含量无显著性差异。综上,除阿魏酸及正丁基苯酞外,直播当归中其他指标成分含量都优于移栽当归(总灰分、酸不溶性灰分含量低于移栽当归),因此,阿魏酸与正丁基苯酞含量较低是导致直播当归质量排名低的主要原因。四、直播与移栽当归药理作用的比较研究通过培养骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E集落及脾淋巴细胞,测定当归水煎液抗DPPH自由基及羟自由基的能力,比较直播与移栽当归的药理作用。结果:直播当归水煎液可明显促进环磷酰胺导致的小鼠血虚模型骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E集落形成,与移栽当归相比,两者促进骨髓造血祖细胞CFU-GM与BFU-E集落形成的能力没有显著性差异。由环磷酰胺导致的免疫缺陷小鼠脾淋巴细胞经ConA刺激后,计算脾淋巴细胞增值率,直播当归组脾淋巴细胞增值率达到34.4%,移栽当归组脾淋巴细胞增值率达35.7%,直播当归水煎液对脾淋巴细胞的增值作用较移栽当归稍低。另外直播当归水煎液在0.1~3.2 mg/m L浓度范围内对DPPH自由基的清除能力较移栽当归高,但对羟自由基的清除能力却较低。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;S567.239
【图文】：

混合对,当归,样品

（B）图 1-1 直播与移栽当归样品（A）与混合对照品（B）的 HPLC 图1.阿魏酸 2.正丁基苯酞 3.Z-藁本内酯 4.正丁烯基苯酞.2.4 方法学考察.2.4.1 线性关系考察取已配制好的混合对照品溶液 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，按照“3.2.3”的色谱条件测定各峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（行线性回归，4 种成分在检测浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系，线性范围性回归方程及相关系数见表 1-5。表 1-5 线性关系考察结果指标成分回归方程 r 线性范围（μg）阿魏酸 Y=753.67X+106.94 0.9999 0.021 ~ 1.470

混合对,当归,样品,H酸

23（B）图 1-2 直播与移栽当归样品（A）与混合对照品（B）的 HPLC 图.天冬氨酸（Asp） 2.谷氨酸（Glu） 3.丝氨酸（Ser） 4.甘氨酸（Gly） 5.组氨酸（H酸（Arg） 7.苏氨酸（Thr） 8.丙氨酸（Ala） 9.脯氨酸（Pro） 10.酪氨酸（Tyr）（Val） 12.蛋氨酸（Met） 13.胱氨酸（Cys-Cys） 14.异亮氨酸（Ile） 15.亮氨酸（L16.苯丙氨酸（Phe） 17.赖氨酸（Lys）

增值率,水煎液,当归,脾淋巴细胞

培养箱中培养 24 h，测定前 4 h 加入 5 mg/mL 的 MTT10 μL/孔，继续培养 4 h，小心吸取上清液，加入 DMSO150 μL/孔，避光摇匀10min，在490nm下用酶标仪测定OD值，计算每组脾淋巴细胞增值率，结果如图2-1。淋巴细胞增殖率=（ConA的平均OD值-对照组的平均OD值）/对照组的平均值×100%

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