蝙蝠蛾拟青霉的大豆培养基的筛选及其对肾脏和睾丸损伤的恢复作用

发布时间：2020-08-15 08:02

【摘要】：蝙蝠蛾拟青霉菌性温,味甘,入肺,肾经,有补益肺肾,秘精益气的功效。蝙蝠蛾拟青霉菌(Paecilomyces hepiali ChenDai)是子囊菌门(Ascomycota),散囊菌纲(Eurotiomycetes),散囊菌目(Eurotiales),丛梗孢科(Moniliaceae)拟青霉菌(Paecilomyces Bain),是从冬虫夏草中分离得到的无性世代菌株,其与天然冬虫夏草具有相似的化学和营养成分及药理作用。目前蝙蝠蛾拟青霉菌工业化发酵生产出的菌丝体发酵产品已获得国家新药证书,并列入《中国药典》。本文对制备蝙蝠蛾拟青霉菌培养基的原材料大豆进行宏观和显微的鉴定,大豆质地坚硬饱满,不同大豆品种在豆脐颜色、粒径、百粒重等宏观形态上存在差别。大豆籽粒分为种皮和子叶两个部分,种皮由表皮层、栅栏层、滴漏层、薄壁层、下皮层5个组成部分,大豆子叶占据籽粒大部分体积,由类圆形薄壁细胞自内向外由小到大构成。不同品种大豆之间营养成分含量存在显著差异,粗蛋白含量最高是吉农33号,其次是吉农36号、吉农48号;粗脂肪含量最高是江西655号,其次是江西1978号、江西686号;钙含量最高是吉农18号,其次是吉农51号、吉农29号;镁含量最高是吉农33号,其次是江西655号、吉农48号;铜含量最高是吉农48号,其次是吉农71号、吉农45号;锌含量最高是吉农45号,其次是吉农33号、吉农38号大豆;铁含量最高是吉农29号,其次是吉农71号、吉农45号;锰含量最高是吉农45号,其次是吉农28号、吉农51号;总异黄酮含量最高是吉农45号,其次是吉农51号、吉农48号。研究表明甲醇回流提取的方法极大提高了大豆总异黄酮提取率。本文为规范原材料大豆重金属和农药残留量,建立了同时检测常用于大豆生产的乙草胺、广灭灵(异恶草松、异VA草酮)、2-4D丁酯、多效唑、氰戊菊酯、敌敌畏、乐果农药残留量的GC-MS/MS检测方法,该方法灵敏可靠,测定的10种大豆样品农药残留均未超标。10种大豆重金属检测中有6种大豆铬超标,1种铅超标,1种镉超标,砷、汞未超标,因此,在培养基原料筛选时,应多关注重金属超标问题,以保证蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物的安全性。本文同时测定了不同品种大豆加工成的豆粕的营养成分含量,其间存在显著差异,粗蛋白含量最高是豆粕36号,其次是豆粕33号、豆粕71号;粗脂肪含量最高是豆粕71号,其次是豆粕48号、豆粕33号;钙含量最高是豆粕45号,其次是豆粕18号、豆粕48号;镁含量最高是豆粕18号,其次是豆粕51号、豆粕71号;铜含量最高是豆粕38号,其次是豆粕36号、豆粕71号;锌含量最高是豆粕38号,其次是豆粕48号、豆粕51号;铁含量最高是豆粕38号,其次是豆粕29号、豆粕18号;锰含量最高是豆粕28号,其次是豆粕51号、豆粕48号;总异黄酮含量最高是豆粕51号,其次是豆粕18号、豆粕28号。本文将不同品种的豆粕培养基发酵培养蝙蝠蛾拟青霉菌,蝙蝠蛾拟青霉菌丝透明,菌落白色,20d可长满PDA培养基,液体培养时,不产生菌球,研究丰富了蝙蝠蛾拟青霉菌的生物学特性研究内容。发酵产物生物量和有效成分含量之间存在显著差异,发酵产物中生物量最高是吉农33号培养产物,其次是吉农38号培养产物、吉农18号培养产物;麦角甾醇含量最高是吉农29号培养产物,其次是吉农36号培养产物、吉农51号培养产物;腺苷含量最高是吉农18号培养产物,其次是吉农29号培养产物、吉农45号培养产物;腺嘌呤最高是吉农38号培养产物,其次是吉农29号培养产物、吉农36号培养产物;虫草素最高是吉农48号培养产物,其次是吉农45号培养产物、吉农36号培养产物。本文采用Pearson方法分析培养基原材料大豆和培养基豆粕的营养成分与发酵产物生物量和有效成分含量之间的相关性。研究结果表明,培养基中的豆粕和原料大豆主要营养成分含量对蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物品质有显著影响,大豆中钙和大豆苷含量越高,蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物中腺苷含量越高。豆粕中钙、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量越高,蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物中腺苷含量越高;豆粕中钙、镁、大豆苷、大豆苷元、染料木素、总异黄酮含量越高,蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物中腺嘌呤含量越低;豆粕中铁含量越高,生物量越大。综合以上研究结果,制定了《优质大豆(供发酵菌粉用)质量标准》,用于保证蝙蝠蛾拟青霉菌发酵产物有效性和稳定性。本文用腺嘌呤建立肾脏和睾丸损伤的小鼠模型,运用现代药理学的方法研究蝙蝠蛾拟青霉菌秘精益气、温肾助阳的传统功效。将小鼠随机分为空白组、模型组和蝙蝠蛾拟青霉菌粉的5个剂量组(350mg/kg、550mg/kg、750mg/kg、1500mg/kg、3000mg/kg)。研究结果表明蝙蝠蛾拟青霉菌对腺嘌呤造成的肾脏和睾丸损伤能够起到恢复作用,可以使小鼠体重逐渐恢复上升趋势,HE染色、Masson染色的组织病理学检查显示其对受损的肾脏和睾丸组织结构有恢复作用,能够大幅降低肾脏和睾丸组织纤维化情况,并调节血清中多种激素含量,改善生精过程中多种关键酶的水平,使BUN、Cr、FSH、LH、ACP、SDH和LDH水平趋向正常化,稳定下丘脑-垂体-肾上腺轴和下丘脑-垂体-性腺轴。其中蝙蝠蛾拟青霉菌1500mg/kg剂量组恢复作用显著优于其他剂量组。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S565.1;R285
【图文】：

显微结构,大豆种皮,细胞

又称海绵柔组织，由 7-8 列细胞组成，横向排列，细胞壁很薄，组织疏很强的吸水力，厚度 13-28μm；下皮层由一排扁圆形细胞组成，排列松散，厚度 3-6图 1.1a 所示。子叶占据大豆子粒的大部分体积，子叶细胞排列的致密程度可以近似反个子粒的质地。显微观察显示，大豆子叶细胞为类圆形薄壁细胞，内含大量糊粉粒及油。子叶外层细胞比内层细胞大而排列疏松，核心细胞小而排列致密，如图 1.1b 所

大豆,粗蛋白含量,江西

大豆粗蛋白含量显著高于其他 12 个品种，江西 655 号粗蛋白，测得的粗蛋白含量在 33.6-39.5%范围内。大豆粗蛋白含量>吉农 48 号大豆>吉农 36 号大豆>吉农 29 号大豆>吉农 45 号1978 号大豆>吉农 51 号大豆>吉农 38 号大豆>吉农 18 号大豆大豆>江西 655 号大豆（图 1.2，表 1-5）。

大豆,粗脂肪含量

测定大豆粗脂肪含量显著高于其他 12 个品种，吉农 51 号与 38 号和吉农 28 号之间粗脂肪含量无显著性差异，但显肪含量在 16.78-30.53%范围内。大豆粗脂肪含量由高至8 号大豆>江西 686 号大豆>吉农 36 大豆>吉农 33 大豆 45 大豆>吉农 28 大豆>吉农 38 大豆>吉农 71 大豆>吉农 1-5）。4±0cd29.44±0.05b491.23±9.50e2178.20±19.35ef9.30±0.30f36.80±0.44g1226.8±0.b29.82±0.07b395.3±3.80f2255.40±11.19cde9.20±0.17f37.60±0.63g1216.5

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