桑白皮中对hCE2有抑制作用的成分研究

发布时间：2020-08-17 15:52

【摘要】：目的:桑白皮是临床常用中草药,具有泻肺平喘、利水消肿的功效,目前多用于治疗肺热痰多引起的喘咳、实证水肿等疾病。现代药理学研究表明,桑白皮具有抗炎、抗肿瘤、止泻等多种作用。伊立替康是临床常用抗癌药物,广泛用于成人转移性大肠癌的化疗。伊立替康在人体经羧酸酯酶2(hCE2)代谢后的产物SN-38可对肠道造成损伤而引起严重的迟发型腹泻副作用,大大限制了伊立替康在临床中的应用。hCE2是人体内重要的药物代谢酶,在肠道中呈高分布。联合应用安全、高效的hCE2抑制剂可减缓这一严重副作用,提高伊立替康化疗患者的耐受性和生存质量。本研究旨在鉴定桑白皮中含有的hCE2天然抑制剂,并对其抑制能力进行表征,为桑白皮缓解伊立替康相关致死性腹泻副作用提供科学依据。方法:1.利用荧光酶标仪构建人肝微粒体(HLMs)中hCE2的探针底物(FD)及其相应代谢产物的定量分析方法,采用体外人肝微粒体-羧酸酯酶探针底物共同孵育的方法,评估桑白皮提取液对hCE2活性的影响。2.利用超高速液相色谱(UFLC-UV)对桑白皮提取液所含有的化学成分进行片段分离,每隔30s一个连续接取LC洗脱片段,并对接取的180个LC片段进行抑制活性测定,从而建立桑白皮提取液对hCE2的指纹图谱。参照标准品,利用液相色谱-二极管阵列检测器-电喷雾离子化串联质谱法(LC-DAD-ESI-MS/MS),通过对比LC保留时间、紫外光谱和高分辨质谱鉴定桑白皮中对hCE2有抑制活性的成分。3.采用体外人肝微粒体-羧酸酯酶探针底物共同孵育的方法评估每种活性成分对hCE2的抑制活性,利用Graphpad 6.0非线性拟合计算其半数抑制浓度IC50值。继续用Lineweaver-Burk作图和Dixon作图计算抑制动力学参数Ki并判断抑制类型。4.利用标准品做出桑白皮所含活性成分的标准曲线,计算桑白皮中各种活性成分的含量。结果:1.桑白皮乙醇提取物对伊立替康的关键代谢酶hCE2具有明显的抑制作用,其半数抑制浓度IC50值为30.32μg/mL。2.通过桑白皮提取液的指纹图谱可以看出,有三个成分对hCE2表现出强烈的抑制作用。经与标准品对比LC保留时间、紫外光谱和高分辨质谱结果鉴定,这三种成分分别为桑根酮D、桑黄酮G和桑根酮C。3.三种成分对hCE2的抑制能力和类型也被检测出来,即桑根酮D、桑黄酮G和桑根酮C对hCE2均表现为强烈的非竞争性抑制作用,抑制常数Ki分别为0.97μM、1.09μM、0.76μM。4.三种成分在桑白皮中的含量分别为576.5μg/g,98.0μg/g,781.4μg/g。结论:中药桑白皮中含有对hCE2有强烈抑制作用的活性成分,桑白皮在与伊立替康联用减少伊立替康相关的致死性腹泻,从而发挥中西药物相互作用优势方面具有很好的应用前景。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

【参考文献】

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本文编号：2795522