【摘要】：目的:通过观察具有益气养阴、活血化痰功效的通络糖泰方对高糖培养SD大鼠施万细胞(Schwann Cells,SCs)增殖和分化的影响,从髓鞘再生修复的角度探讨通络糖泰治疗糖尿病周围神经病变的可能机理,为临床用药提供一定的理论依据。方法:1.用新生3-5天SD大鼠坐骨神经组织,进行体外原代培养SCs,用S-100免疫荧光鉴定其纯度。2.用CCK-8法检测50mmol/L(mM)的葡萄糖培养组分别在24h、48h、72h、96h的SCs增殖;实时荧光定量PCR法检测50mM葡萄糖培养组分别在24h、48h、72h的SCs髓鞘调控基因P0、MAG、krox-20 mRNA表达。3.CCK-8法检测高糖含极低(2.5%)、低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度通络糖泰血清培养组分别在24h、48h、72h、96h的SCs增殖;实时荧光定量PCR法检测高糖含极低(2.5%)、低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度通络糖泰血清培养组分别在24h、48h、72h的SCs髓鞘调控基因P0、MAG、krox-20 m RNA表达。结果:1.S-100免疫荧光鉴定SCs的纯度达94.4%,可确保后期实验数据可靠。2.CCK-8法检测结果证实:与对照培养组相比,50mM葡萄糖培养组分别在24h、48h、72h、96h的SCs增殖下降,且具有时间相关性(随时间的增加,细胞增殖逐渐下降),在72h差异具有统计学意义(P0.01),且该趋势可维持至96h。与高糖培养组相比,高糖含极低(2.5%)、低(5%)、中(10%)浓度通络糖泰血清培养组分别在24h、48h、72h、96h的SCs增殖上升,在72h差异具有统计学意义(P0.01),该趋势可持续至96h。与高糖培养组相比,高糖含高(20%)浓度通络糖泰血清培养组在24h、48h、72h、96h的SCs增殖下降,该差异在48h具有统计学意义(P0.01),且该趋势可维持至72h、96h。3.实时荧光定量PCR检测结果证实:与对照培养组相比,50mM葡萄糖培养组分别在24h、48h、72h的SCs髓鞘调控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表达值均下调,但MAG mRNA表达的差异在48h具有统计学意义(P0.01);Krox-20、P0 mRNA表达的差异在48h、72h均具有统计学意义(P0.01)。与高糖培养组相比,高糖含极低(2.5%)、低(5%)、中(10%)浓度通络糖泰血清培养组分别在24h、48h、72h的SCs髓鞘调控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表达均上调,其中高糖含低(5%)、中(10%)浓度通络糖泰血清培养组SCs Krox-20、P0 mRNA表达的差异在48h、72h具有统计学意义(P0.05),而高糖含中(10%)浓度通络糖泰血清培养组SCs MAG m RNA表达的差异在48h具有统计学意义(P0.05)。与高糖培养组相比,高糖含高(20%)浓度通络糖泰血清培养组分别在24h、48h、72h的SCs P0、MAG、Krox-20 mRNA表达的差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.本实验体外原代培养SCs的方案可行。2.高糖可使SCs增殖及髓鞘调控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表达下调,即高糖可抑制SCs增殖及成髓化。3.通络糖泰可改善高糖对SCs增殖及成髓化的抑制作用,促使SCs增殖及髓鞘调控基因P0、MAG、Krox-20 mRNA表达上调,即通络糖泰可促进SCs增殖及成髓化,其可能的机制与通络糖泰上调IGF-I m RNA表达相关,进而改善DPN髓鞘再生障碍的病理特征,防治DPN。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
β-actin扩增曲线
β-actin溶解曲线
BAX扩增曲线
【参考文献】
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1 王明选;通络糖泰方对糖尿病周围神经病变大鼠血清肿瘤坏死因子-α影响的实验研究[D];成都中医药大学;2008年
本文编号：
2796184
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