青钱柳叶化学成分研究、总黄酮的提取工艺优化及其降血糖活性研究

发布时间：2020-08-21 11:45

【摘要】：目的:研究青钱柳叶的化学成分,发掘先导化合物或活性化合物,进一步完善青钱柳的物质基础,为该珍稀资源的进一步开发利用提供理论依据。优化双水相法(ATPS)提取青钱柳叶总黄酮的工艺条件,使其总黄酮的提取率达到最大化。用双水相最优条件下获得的青钱柳叶提取物进行体内降血糖试验,研究其对糖尿病小鼠的降血糖作用。方法:以广西百色市青钱柳叶为原料,甲醇作提取溶剂,浸提得到总提取物。采用硅胶柱色谱、反向柱色谱、Sephadex LH-20色谱等多种方法对青钱柳叶石油醚和乙酸乙酯部位的化学成分进行分离纯化,对分离得到的单体化合物采用理化检识、HPLC、EI-MS、~(13)C-NMR、~1H-NMR等方法进行结构鉴定。超声波辅助双水相法提取青钱柳叶总黄酮,响应面Box-Behnken设计优化提取工艺,超高效液相色谱-四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)分析双水相提取物中的黄酮成分。高脂饮食诱导、腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病小鼠模型,随机分组设置空白组、模型组、二甲双胍组、青钱柳叶提取物高、中、低剂量组。测定小鼠空腹血糖,给药两周后测定小鼠血清胰岛素(INS)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、极低密度脂蛋白含量(VLDL-C),采用HE染色法观察实验性糖尿病小鼠肝脏和胰腺的病理学变化,评估青钱柳叶提取物对其病变的影响。结果:从青钱柳叶提取物中分离得10个化合物,鉴定了9个化合物,分别为:5-羟基-2-甲氧基-1,4萘醌,(5-hydroxy-2-methoxy-1,4-naphthoquinone)(1),β-香树脂醇(β-amyrin)(2),D:B-frienoolean-5-en-3β-ol(3),β-谷甾醇(β-sitosterol)(4),齐墩果酸(olean-12en-28-oic acid)(5),2α-羟基齐墩果酸(maslinic acid)(6),熊果醇(uvaol)(7),3β,23-dihydroxy-1-oxo-olean-12-en-28-oic acid(8),阿江榄仁酸(arjunolic acid)(9)。化合物10结构尚未确定,有待进一步鉴定。超声波辅助双水相法提取青钱柳叶总黄酮的最优工艺为:无水乙醇质量分数33.00%,盐的质量分数15.00%,提取时间52min,液固比33:1,总黄酮提取率达3.00±0.10%。用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱分析青钱柳叶双水相提取物,初步定性13种黄酮类化合物。青钱柳叶提取物中剂量能明显改善2型糖尿病小鼠体重减轻的这一症状(P0.01),低剂量组降低糖尿病小鼠空腹血糖(P0.05),高剂量组显示出降低血清胰岛素的作用(P0.05),青钱柳提取物能降低糖尿病小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的含量,增加高密度脂蛋白含量。糖尿病模型组小鼠肝细胞出现不同程度的水肿变性、汇管区和小叶内出现炎细胞浸润;胰岛细胞数量变少且萎缩,形状不规则。二甲双胍组和青钱柳叶提取物治疗组小鼠的肝脏和胰腺变化较模型组有不同程度的减轻。结论:鉴定得到的9个化合物,除化合物1为萘醌,化合物4为一个四环三萜,其余化合物都属于五环三萜类化合物,其中化合物3、7、8为首次从该植物中分离。化合物3和8属于齐墩果烷型五环三萜,化合物7为乌苏烷型五环三萜。双水相提取青钱柳叶总黄酮是一种高效绿色经济的提取方法,总黄酮提取物具有降低小鼠空腹血糖、降脂、改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞的作用,具有更广泛应用于药品和食品的潜力,其降血糖的作用机制仍需进一步研究。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285.5
【图文】：

相图,双水相,相图

1双水相相图

单因素试验,响应面

2单因素试验结果

等高线图,响应曲面,等高线图

3响应曲面和等高线图

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