黄芪补气汤提取物的免疫活性及抗肿瘤活性研究

发布时间：2020-08-21 15:41

【摘要】：黄芪补气汤出自秦伯未所著的《中医临证备要》,属于补益类方剂,主要用于因冲任虚损,气血虚弱不能摄胎且伴有畏寒腹痛的小产患者。本实验室前期采用秀丽隐杆线虫感染模型研究表明,黄芪补气汤可以通过提高线虫宿主的免疫力来达到抗感染的效果。基于上述研究,本实验以黄芪、当归、肉桂配比为10:5:3的质量比,采用水提法制备了黄芪补气汤提取物;并根据《中华人民共和国药典(2015版)》有关药材标志性成分的测定方法,测定了提取物中阿魏酸和总黄酮的含量,为提取物的质量稳定性和可控性提供了参考;同时按照《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》关于增强免疫力的检测项目,以健康雌性昆明小鼠作为研究对象,处理组按照生药量1.5、3、9 g/kg体重三个剂量灌胃给药,并设置空白对照组(蒸馏水)和阳性药组(胸腺法新),连续给药30天,分别测定了脏器/体重比值、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬-细胞功能、NK细胞活性。另外,采用健康昆明小鼠进行了急性毒性试验。最后,采用MTT法研究了黄芪补气汤提取物对几种不同类型肿瘤细胞的生长抑制作用。得到的结论如下:1、黄芪补气汤提取物的制备工艺为:采用水提法煎煮两次,第一次加8倍量的蒸馏水,煎煮45 min;第二次加6倍量的蒸馏水,煎煮30 min。2、黄芪补气汤提取物选择阿魏酸和总黄酮作为标志性成分进行质量控制,分别采用高效液相法和紫外分光光度法进行含量测定,测得阿魏酸含量为167μg/g浸膏,总黄酮含量为6.18 mg/g浸膏。3、按照提取物浸膏最大溶解浓度1.02 g/mL,0.4 mL/10 g体重灌胃,结果表明,黄芪补气汤提取物的小鼠口服最大耐受量(MTD)大于40.8 g/kg,远大于保健食品规范毒理学结果的判定中要求的大于或等于10 g/kg。4、黄芪补气汤提取物具有促进小鼠迟发型变态反应、提高单核-巨噬细胞吞噬能力以及NK细胞活性的功效,而对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化反应、血清溶血素水平无作用,根据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》有关增强免疫力功能的结果判定标准,黄芪补气汤提取物具有增强免疫力的保健功能。5、黄芪补气汤提取物对肺癌细胞、大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞、黑色素瘤细胞、肝癌细胞(A549、PC12、B16、HepG2)均具有抑制作用,其抑制作用呈时间和剂量依赖性。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

标准曲线,阿魏酸,标准曲线,峰面积

图 2.4 阿魏酸标准曲线Figure2.4 The standard curve of ferulic acid度实验品溶液在色谱条件下连续进样 5 次，测定峰面积，结果峰面积的 R器精密度良好。表 2.2 精密度实验测定结果Table2.2 The result of precision experiment样次数峰面积平均值 RSD（%1 1614640815973322 0.6272 159251953 159125044 159089765 15973526

芦丁,吸光值,序号,平均值

图 2.5 芦丁标准曲线Figure2.5 The standard curve of rutir密度实验定 6 份同一芦丁标准品溶液，测定 OD 值，结果吸光值的 RSD 为 1度良好。表 2.7 精密度实验测定结果Table2.7 The result of precision experiment准品序号 OD 值平均值 RSD（%1 0.2800.291 1.982 0.2963 0.2904 0.294

提取物,体重,最大耐受量,正常增长

论文黄芪补气汤提取物的免疫活性析时，先按照程序进行方差齐性检验，符合方差齐性的，计算间无显著性差异；若 F≥F0.05，P≤0.05，用各实验组与对方差齐性或者非正态的数据，需要进行适当的转换，满足行统计；对于转换后仍不符合要求的，改用秩和检验进行试验示，给药后小鼠体重正常增长，各组间无显著性差异（P<便正常、毛色正常，无震颤、抽搐、急躁等症状，无死亡的小鼠口服最大耐受量（MTD）大于 40.8 g/kg，远大于保要求的大于或等于 10 g/kg。

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