蒺藜化学成分及生物活性研究

发布时间：2020-08-23 15:59

【摘要】：中药材蒺藜为蒺藜科蒺藜属植物蒺藜(Tribulus terrestris L.)的干燥成熟果实,具有抗衰老、抗菌、镇痛、调节血脂、降血糖、抑癌、利尿、性强壮、抑制酪氨酸酶等药理作用,常用于治疗冠心病、心绞痛、脑血栓、糖尿病、高血脂等疾病。本文从蒺藜的水提物中分离得到21个单体化合物(JL-1~JL-21),利用1D-NMR、2D-NMR、MS、IR等波谱学手段,结合其理化性质,鉴定出其中19个化合物的化学结构,其中3个为新化合物,3个为首次从蒺藜中分得的化合物。新化合物分别为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-18)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-19)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-21)。首次分得的化合物分别为吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、曼诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、新海柯皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-9)。在研究化学成分的基础上,本文建立了蒺藜中8种螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量测定方法。这8种螺甾型皂苷分别为曼诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-2)、(25R,S)-海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-3)、海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-4)、(25R,S)吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-5)、吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、替告皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[α-L吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-7)和海柯皂苷元(JL-8)。首先,通过对提取溶剂种类、提取方法、提取溶剂用量、提取次数以及SPE种类及洗脱条件等因素的考察,确立了最佳提取与富集方法。其次,进行了方法学考察。实验结果表明,化合物JL-1、JL-2、JL-3、JL-4和JL-7在0.40~20.00μg范围内峰面积y(lgS_均)和进样浓度x(lgm)具有良好的线性关系,化合物JL-5、JL-6、JL-8在0.20~10.00μg范围内峰面积y(lgS_均)和进样浓度x(lgm)具有良好的线性关系。化合物JL-1~JL-8的精密度、重复性、稳定性以及加样回收率的RSD值均小于2.0%,说明本实验所建立的含量测定方法具有精密度好、准确度高等优点。含量测定结果表明,不同产地蒺藜药材中化合物JL-1~JL-8的含量差别不是很明显,8种螺甾型皂苷的平均含量分别为0.049 mg·g~(-1)(JL-1),0.105 mg·g~(-1)(JL-2),0.125 mg·g~(-1)(JL-3),0.063 mg·g~(-1)(JL-4),0.050 mg·g~(-1)(JL-5),0.039 mg·g~(-1)(JL-6),0.081 mg·g~(-1)(JL-7),0.013 mg·g~(-1)(JL-8)。本文还利用大孔吸附树脂分离方法制备了蒺藜总呋甾皂苷和蒺藜总螺甾皂苷,并对二者的清除羟基自由基活性、抑制酪氨酸酶活性以及抑制肺癌A549细胞的增殖活性进行了对比研究。实验结果表明,蒺藜总螺甾皂苷和总呋甾皂苷均具有清除羟基自由基、抑制酪氨酸酶及抑制肺癌A549细胞增殖的活性,其中蒺藜总螺甾皂苷的活性优于蒺藜总呋甾皂苷。综上所述,本论文从蒺藜的水提物中分离出21个单体化合物,鉴定了19个单体化合物,其中3个为新化合物,3个为首次从蒺藜中分得的化合物;建立了蒺藜中8种螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量测定方法;研究了蒺藜总螺甾皂苷和蒺藜总呋甾皂苷的3种生物活性。本论文的研究结果为蒺藜药效物质的深入研究,蒺藜质量标准的完善以及蒺藜中甾体皂苷类化合物的应用研究提供了新的科学依据。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285
【图文】：

化合物 JL-19 的化学结构式和 HMBC 相关谱见图 2.6 和 2.7，核磁数据见表2.5。化合物 JL-18 和化合物 JL-19 均未见文献报道，故确认化合物 JL-18 和化合物 JL-19 为新化合物。OOR2R1OHHOOHR1=-β-D-Gal4-1β-D-GlcR2=-β-D-Glc图 2.4 化合物 JL-18 的结构式

图 2.7 化合物 JL-19 的 HMBC 相关表 2.5 JL-19 的13C NMR(150MHz)和1H NMR(600MHz)数据(δ,ppm,C5D5N)Position JL-19 Position JL-19cHcH123456789101112131445.870.684.934.144.828.232.434.754.537.021.640.241.256.42.09(m)4.47(m)3.72(m)1.36(m)0.96(m)1.03(m)1.16(m)1.12(dd)0.49(dd)-----1.30(m)1.00(m)-----0.90(s)3-O-Gal 1234564-Glc 12345626-O-Glc 12103.673.275.580.375.961.0107.376.178.872.478.963.2105.375.34.83(d ,J=7.8Hz)4.34(m)4.12(m)4.58(m)3.97(m)4.19(m)5.20(d ,J=7.8Hz)4.17(m)4.04(m)3.97(m)3.99(m)4.37 (m)4.63(d ,J=7.8Hz)3.71(m)

B.样品溶液图 3.1 化合物 JL-1～JL-8 的高效液相谱图3.3 提取条件的考察为保证蒺藜干燥果实中化合物 JL-1~JL-8 能够提取完全，实验中以 JL-1~JL-8的色谱峰面积为考察指标，对提取溶剂、提取方法、液料比和提取次数这四个影响因素进行了考察。3.3.1 提取溶剂考察取蒺藜干燥果实，粉碎，过 60 目筛，精密称取 4 份，每份 5.0g。分别用 50mL 水、丙酮、甲醇、乙酸乙酯为提取溶剂进行提取，每份药材加热回流提取 1次，时间均为 2.0 h，合并提取液，减压回收溶剂，加入适量蒸馏水溶解，过 AB-8SPE 固相萃取小柱，40%乙醇-水淋洗，再以 85%乙醇-水洗脱，回收溶剂至干，

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 解世全;李瑞海;;不同产地蒺藜黄酮成分比较[J];中国药师;2015年10期

2 张慧;王云;韩继举;冯蕾;赵晓民;;蒺藜总皂苷抗动脉血栓形成的作用[J];中国医院药学杂志;2015年14期

3 李昊月;冯琳;李瑞海;贾天柱;;18个不同产地蒺藜药材中蒺藜皂苷元的HPLC含量测定[J];实用药物与临床;2015年01期

4 纪思宇;申枢;李瑞海;贾天柱;王东;;不同产地蒺藜药材中氨基酸成分比较分析[J];实用药物与临床;2014年02期

5 陈志伟;梅庆步;张琪;许惠玉;郑立红;;蒺藜皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响[J];中国老年学杂志;2013年18期

6 刘毅;张风莉;;明目蒺藜丸治疗流行性角结膜炎247例临床分析[J];西北国防医学杂志;2013年03期

7 崔恩;;补充蒺藜皂甙对中长跑运动员睾酮、EPO和红细胞相关参数的影响[J];首都体育学院学报;2013年02期

8 吴克磊;康利平;熊呈琦;赵阳;余河水;张洁;马百平;;蒺藜全草中甾体皂苷类化学成分研究[J];天津中医药大学学报;2012年04期

9 刘巍;朱天全;曾艳;程志国;吴丹;孙申国;;HPLC法测定蒺藜粗皂苷中蒺藜呋甾皂苷甲的含量[J];中国药师;2012年09期

10 方惠娟;毕开顺;钱忠直;王珏;李玉兰;刘敏;庞发根;王铁杰;;HPLC-DAD-ELSD测定蒺藜中5个活性成分含量[J];药物分析杂志;2012年06期

相关博士学位论文 前4条

1 杨洁;奥克梯隆型人参皂苷的半合成及生物活性研究[D];吉林大学;2016年

2 张爽;蒺藜皂苷单体B对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D];吉林大学;2011年

3 徐雅娟;蒺藜果甾体皂苷成分鉴定及其对脑缺血损伤保护作用研究[D];吉林大学;2007年

4 王显刚;蒺藜总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用与机理研究[D];山东中医药大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 李春娜;蒺藜茎叶化学成分及质量分析研究[D];北京中医药大学;2015年

2 范冰舵;蒺藜地上部分化学成分研究[D];北京中医药大学;2014年

3 金银花;蒺藜果呋甾型皂苷类成分的研究[D];吉林大学;2013年

4 单体强;蒺藜果皂苷元组成及活性研究[D];长春中医药大学;2012年

5 殷宗元;蒺藜果中螺甾型皂苷类成分的研究[D];吉林大学;2011年

6 杨俊英;蒺藜果呋甾皂苷的分离鉴定及含量测定研究[D];长春中医药大学;2009年

7 苏兰;蒺藜果实中甾体皂苷类成分的研究[D];沈阳药科大学;2008年

8 石昌杰;蒺藜皂苷抗动脉粥样硬化作用研究[D];华东师范大学;2008年

9 杨兵兵;1.体外抗肿瘤药物筛选中CCK-8、MTT和SRB法的比较研究 2.37个二萜化合物体外抗肿瘤活性和作用机制研究以及构效关系分析[D];昆明医学院;2007年

10 杨煌建;蒺藜皂苷抑制肾癌细胞增殖的研究[D];华东师范大学;2006年

本文编号：2801722