布渣叶总黄酮苷的降脂活性及其芹菜素碳苷的定性定量分析

发布时间：2020-08-28 15:07

　　布渣叶是广东习用地产药材,“药食同源”性植物,一直被广泛的用于临床治疗与民间茶饮。自清朝起,岭南本草书籍中就有关于“破布叶”清热、解毒等药效的记载,其后《岭南采药录》、《陆川本草》等也均有记载。2010年后,各版《中华人民共和国药典》将其收录,可见其药用价值已获得充分的肯定。遗憾的是,目前布渣叶的使用价值大部分局限于凉茶等饮料的配制,其药用价值很少得到发展。为了进一步的研究和开发布渣叶资源,本文参考其他中药类文献和产品,对总黄酮部位进行提取、分离和纯化,获得MpTFF及碳苷黄酮单体;建立质量规范,测定理化性质;研究MpTFF的抗氧化、降脂活性及其降脂机制。1.本文采用加热、冷凝回流的方法提取布渣叶总黄酮部位,选用AB-8型树脂进行有效成分富集。随后应用凝胶柱层析(葡聚糖凝胶LH20)纯化,使该部位的苷与苷元分离。最终,采用喷雾干燥技术(进风温度210℃;喷雾空气流量538L·h-1;抽气机输出85%;泵输出10%)获得MpTFF粉末。随后,应用LC-MS技术结合对照品的精确分子量、相对保留时间以及MS和MSE的裂解模式对MpTFF中所含有的8种黄酮苷进行定性分析,分别为:维采宁-2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、维采宁-1、异牡荆苷、紫云英苷和水仙苷。2.分别建立以芦丁为对照品测定总黄酮苷含量(55.73±0.65%)的比色法和同时测定8种黄酮苷成分的HPLC法—Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇(A)和水(含0.2%磷酸,B),流速为1 m L·min-1。梯度洗脱程序:0~12 min,82%→70%(B);12~45 min,70%→55%(B);45~60 min,55%→20%(B);检测波长为276 nm,柱温为35℃。二者结合可以为MpTFF提供更加科学的质量控制。随后,以摇瓶法测定MpTFF在水、pH 6.8磷酸盐缓冲液(PBS)和0.1moL·L-1盐酸中的溶解度,分别为1.46±0.02(略溶)、7.48±0.07(溶解)和25.84±0.16 g·100m L-1(易溶)。有实验结果可知,MpTFF在三种介质中的溶解度,分别为盐酸PBS水;究其原因可能是由于MpTFF的组成复杂,在酸或碱的环境中,彼此发生相互作用,增大了其溶解度。因此为了更加准确的测定中药成分的溶解度,则需要更加科学的溶解度测定方法。3.采用体外清除DPPH自由基试验以及HLP小鼠的降脂试验对MpTFF的相关活性进行了研究。结果表明其具有较好的清除自由基能力(EC50值为0.038 mg·m L-1),;以312 mg·(Kg·d)-1的剂量给药,MpTFF能够有效的降低HLP小鼠的体重增量,降低TC、TG和LDL-C水平,上升HDL-C水平。同时,对于AST和ALT两种转氨酶的活性水平也具有降低的作用,上述实验证明MpTFF具有一定的抗氧化、保肝和降脂活性。4.采用计算机模拟分子对接的方法,对MpTFF降脂活性成分进行了分析。首先,查阅相关文献,下载与降脂相关的受体;然后,依据MpTFF所含成分建立配体数据库,进行CDOCKER模式的分子对接。结果表明,牡荆苷、异牡荆苷和紫云英苷等能够与受体蛋白有较好的氢键连接。而该结果与文献报道相符,进一步证明异牡荆苷、牡荆苷和紫云英苷等为MpTFF中主要的降脂活性成分。5.以MpTFF为基础进一步进行水解,采用凝胶柱层析、反相ODS柱色谱和半制备型HPLC进行了碳苷黄酮的分离、纯化;1H-NMR,13C-NMR和HRMS进行结构表征,最终鉴定了4种碳苷黄酮,分别为:维采宁-2、牡荆苷、异牡荆苷、异佛莱心苷。其中,维采宁-2是首次从布渣叶中分离出来,同时也是首次从破布叶属植物中分离得到。
【学位单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.1
【部分图文】：

清除率,浓度梯度,猪油

可以看出 MpTFF 溶液具有较好的自由基清除能力，其FF 对高脂乳剂诱导 HLP 小鼠的保护活性脂乳剂的配制[8]方为 4％胆固醇，20％猪油，1％丙基硫氧嘧啶，8%蔗糖，用至 100％制成脂肪乳；氧嘧啶、胆固醇于乳钵中研细，备用。将猪油加热至 40℃使加入乳钵中研细的固体粉末，不断搅拌，溶解。再加入吐温入溶有蔗糖的蒸馏水至 100%，加热使完全溶解，分装，冷图 4-3 浓度梯度 MpTFF 的清除率. 4-3 The clearance rate of MpTFF with different concentration g

小鼠,体重变化,统计软件,湿重

4-4 MpTFF 对 HLP 小鼠体重增重量的影响（n=9, means ± -4 Effects of MpTFF on the body weight gain of hyperlipidem(n=9, means ± SD)统计软件 SPSS 22.0，选择 one-wayANOVA 显著性分析。性差异，**p<0.01，与 MG 呈非常显著差异）了各组小鼠给药前后（2 周）的体重变化情况，结果显示ZK 组和 MpTFF 组小鼠的体重增重量明显降低。XZK 和鼠的体重增量。P 小鼠肝脏指数的测定完毕后，解剖各组小鼠，取肝脏并称其湿重，计算脏器指）。结果见下表 4-3 图 4-5.表 4-3 MpTFF 对 HLP 小鼠肝脏指数的影响(n=9, means ± Sfects of MpTFF on liver index of hyperlipidemic mice (n=9, m

血脂,小鼠,常规,分装

4-5 MpTFF 对 HLP 小鼠肝脏指数的影响（n=9, means ± Sfects of MpTFF on liver index of hyperlipidemic mice (n=9, m知，MG 组的肝脏指数略高于 NG 组，这可能是由于 MG致，但是，由于造模时间较短，肝脏组织还未产生显著的病组肝脏指数略低于 MG 组，说明 MpTFF 和血脂康具有一P 小鼠血脂常规四项测定续喂养 14d 后，禁食不禁水 12h，摘眼球取血，分装于离10min），取血清，按试剂盒提示操作测定血清中 TC、TG果见表 4-4，图 4-6。 4-4 MpTFF 改善 HLP 小鼠血脂常规四项水平(n=9, means ± Effect of MpTFF on improving four Indicators of Lipid in thehyperlipidemic mice (n=9, means ± SD)

【参考文献】