朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响及作用机制研究

发布时间：2020-09-01 16:52

【摘要】：目的:通过实验研究,阐明朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响及作用机制。方法:第一部分:朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响1.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响条件性恐惧模型的复制:将实验动物随机分为空白对照组、模型对照组、给药组,每组10只。给药组实验动物给予朱砂安神丸混悬液(经灌胃途径给予,0.81mg/g),空白对照组、模型对照组均给予相同体积的双蒸水,1次/日,连续7日。在末次给药后,将模型对照组、给药组实验动物依次放入条件性恐惧刺激箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz,75dB)。第125秒,在声音信号的基础上给予实验动物持续5秒的不可逃避的足底电刺激(0.75mA)。第130秒声音信号与电刺激同时结束,130～190秒内不做任何处理。第190秒重复120～190秒过程,连续20次。空白对照组仅给予声音信号不给予电刺激,其他操作相同。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养笼。恐惧记忆习得测试:复制条件性恐惧模型的次日,将各组实验动物依次再放入刺激箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz,75dB)。第130秒声音信号结束,130～190秒内不做任何处理,记录声音信号停止后60秒内实验动物的僵直反应时间。第190秒重复120～190秒过程,连续5次。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养笼。记录各组实验动物的僵直反应时间,以此作为观测指标探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响。2.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影响按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行条件性恐惧模型的复制,在习得测试后的第1、3、5、7天,将各组实验动物依次再放入刺激箱内,重复恐惧记忆习得测试的操作,记录各组实验动物的僵直反应时间,以此作为观测指标探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影响。3.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,将各组实验动物放入大小鼠开场活动实验箱内,记录各组实验动物运动时间、运动距离,以此探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响。第二部分朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马突触可塑性的影响1.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马突触功能可塑性的影响按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,用乌拉坦腹腔注射麻醉各组实验动物,在脑立体定位仪上固定后,埋置自制的刺激电极和记录电极。记录基础水平的群峰电位后,高频强直刺激(HFS)诱导长时程增强(LTP)。记录各组实验动物海马区群峰电位(PS),根据PS的变化率探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马功能可塑性的影响。2.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马突触结构可塑性的影响按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,各组随机选取3只实验动物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海马组织,制作透射电镜超薄切片,在日立(H-7650)透射电镜下放大30000倍观察神经毡周围的突触形态。使用Image-Pro Plus6.0测量海马CA1神经元突触活性区长度、突触PSD厚度、突触间隙宽度,以此探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马结构可塑性的影响。3.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马神经元的保护作用按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,各组随机选取3只实验动物,水合氯醛腹腔注射麻醉后,取出海马组织,制作透射电镜超薄切片,在日立(H-7650)透射电镜下放大8000倍观察海马CA1区神经元形态,放大15000倍观察神经元内细胞器形态。结果:第一部分:朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响1.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响实验结果表明:在条件性恐惧记忆习得阶段的第1min、第3min、第5min时间点以及第2min、第4min时间点,模型对照组实验动物的僵直反应时间高于空白对照组,两者比较具有显著差异(P0.01,P0.05);与模型对照组比较,给药组实验动物的僵直反应时间均低于模型对照组,但两者比较无显著差异。2.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影响实验结果表明:在条件性恐惧记忆消退阶段,各组实验动物的僵直反应时间随着时间的延长逐渐减少;与空白对照组比较,模型对照组实验动物的僵直反应时间在各时间段内均明显高于空白对照组,两者比较具有极显著差异(P0.01);与模型对照组比较,给药组实验动物的僵直反应时间均低于模型对照组,其中,第5日给药组实验动物的僵直反应时间低于模型对照组,两者比较具有显著差异(P0.05),第7日给药组实验动物的僵直反应时间明显低于模型对照组,两者比较具有极显著差异(P0.01)。3.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响实验结果表明:与空白对照组比较,模型对照组实验动物的运动时间、运动距离均小于空白对照组,但两者比较无显著差异;与模型对照组比较,给药组实验动物的运动时间、运动距离均大于模型对照组,但两者比较无显著差异。第二部分:朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马神经元突触可塑性的影响1.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马功能可塑性的影响实验结果表明:高频强直刺激后,实验动物的PS幅值增加的百分率超过了20%,说明LTP诱发成功。与空白对照组比较,模型对照组的PS幅值在第40min、70min、80min、90min、100min时明显增大,两者比较具有显著差异(P0.05);与模型对照组比较,给药组的PS幅值在120min的测定过程中均显著减少,两者比较具有显著差异(P0.05)。2.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马结构可塑性的影响实验结果表明:比较各组实验动物海马CA1区神经元突触的数目及形态,与空白对照组比较,模型对照组实验动物海马神经元神经毡内出现大量空泡,突触数目明显减少,突触前膜、突触后膜的边缘界限不清晰,突触间隙内模糊不清,突触前膜内的突触小泡明显减少甚至消失,突触前膜内线粒体肿胀,内部结构溶解,嵴减少甚至消失。与模型对照组比较,给药组神经毡内未出现空泡,突触数目较多,突触各部分结构界限清晰,突触前膜内的突触小泡也较多,圆而清亮,分布较为密集,突触前、后膜,与空白对照组接近,突触前膜内线粒体结构轻微肿胀,但嵴较多,清晰可见。测量各组实验动物海马CA1区神经元突触活性区长度、突触PSD厚度、突触间隙宽度:模型对照组实验动物的突触活性区长度(212.65±48.63nm)明显小于空白对照组(247.14±27.57nm),两者比较具有极显著差异(P0.01),突触PSD厚度(37.98±7.84nm)明显小于空白对照组(51.20±9.48nm),两者比较具有极显著差异(P0.01),突触间隙宽度(31.73±5.20nm)明显大于空白对照组(22.06±2.80nm),两者比较具有极显著差异(P0.01);给药组实验动物海马CA1区突触活性区长度(238.73±19.20nm)大于模型对照组,两者比较具有显著差异(P0.05),突触PSD厚度(51.54±6.87nm)明显大于模型对照组,两者比较具有极显著差异(P0.01),突触间隙宽度(21.90±2.71nm)明显小于模型对照组,两者比较具有极显著差异(P0.01)。3.朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马神经元的保护作用实验结果表明:比较各组实验动物海马CA1区神经元的形态,空白对照组实验动物的海马神经元细胞结构完整,细胞膜、核膜清晰,细胞浆内细胞器散在分布,且结构完好;模型对照组实验动物的海马神经元细胞结构完整,但出现细胞膜、核膜不清晰,细胞核皱缩等现象,细胞浆内出现空泡,粗面内质网部分出现明显的扩张,线粒体大多出现肿胀、嵴减少或消失的现象,甚至小部分线粒体发生溶解,内部出现空泡,部分神经元细胞胞浆内可见溶酶体;给药组实验动物的海马神经元细胞结构完整、清晰,细胞核大,细胞膜、核膜均完整,细胞浆内细胞器较多,形态较好,细胞浆内空泡、细胞器变形现象比模型对照组减少,粗面内质网扩张现象不明显,线粒体大多形态完好、嵴较多、清晰可见,小部分线粒体略有肿胀,嵴减少。结论:1.朱砂安神丸具有促进恐惧记忆消退的作用。2.朱砂安神丸能够促进恐惧记忆消退的作用与其保护海马神经元,增强海马突触结构与功能可塑性相关。
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

忆的编码和巩固的过程；前扣带回、内侧前额叶是能够调节恐惧情绪的调节中枢；逡逑在条件性恐惧消退中发挥着重要作用的则是海马和内侧前额叶Ｗ。恐惧情绪的基逡逑本神经环路如图１所示。逡逑１７逡逑

实验数据用３Ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０进行统计分析，两组间比较采用独立逡逑样本／检验，Ｐ＜０．０５表示具有显著差异，Ｐ＜０．０１表示具有极显著差异。实验结果逡逑见表２，图２。逡逑表２条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得阶段的僵直反应时间（ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反应时间（ｓ）逡逑组别逡逑逦Ｍｉｎｉ逦Ｍｉｎ２逦Ｍｉｎ３逦Ｍｉｎ４逦Ｍｉｎ５逡逑空白对照组邋〗．３７±０＿４１逦１．４７±０．５０逦１＿５８±０＿２７逦１．６０±0．４４逦１．２５±０．３１逡逑模型对照组逦５５．９７±５．２１＊＊逦５５．６３±９．７３＊逦５７．３７±３．７０＊＊逦５７．６１±１．９６＊逦５５．５６±４．６７＊＊逡逑给药组邋５４．７３±５．９３逦５４．３８±８．３０逦５０．２２±８．２２逦４９．１１±５．１２逦４８．８４±５．４１逡逑注：与空白对照组比较

实验数据用３ｆ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０进行统计分析，两组间比较采用独立逡逑样本／检验，Ｐ＜０．０５表示具有显著差异，Ｐ＜０．０１表示具有极显著差异。实验结果逡逑见表３，图３。逡逑表３条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退阶段的僵直反应时间（３ｆ±ｓ，ｎ＝１０）逡逑僵直反应时间（ｓ）逡逑组别逡逑Ｄａｙｌ逦Ｄａｙ３逦Ｄａｙ邋５逦Ｄａｙ邋７逡逑空白对照组逦４．０８±０．９２逦４．２８±１．４２逦２．９８±０．６８逦２．２１±０．７７逡逑模型对照组逦４６．７４土邋１２．６６＊＊逦４２．５７±１３．６６＊＊逦３１．８６土邋１０．０９＊＊逦２７．３５ｉ８．７４＊＊逡逑给药组逦４２．２２±１２．５９逦３２．７８±１０．０５逦１７．６６±５．７８Ａ逦６．２２±１．９２ＡＡ逡逑注：１）与空白对照组比较，＊Ｐ＜0．0５，邋＊＊Ｐ＜０．０１；逡逑２）与模型对照组比较，ＡＰ＜０．０５，＾ＦＯ．Ｏｌ。逡逑６０逡逑＊＊逡逑５０逦＊＊逡逑＾逦Ｈｈ逡逑ｕｉ邋４0逦１逦．？上．逡逑一邋ｗ逦＊＊逡逑画逦：：：：：—Ｌ逦ｔ逦＊＊逡逑＾邋３０逦｜邋N逦｜：丨：逡逑ｍ逦ｒ－＾ｈ逡逑必逦：：：：Ａ逡逑R*２０逡逑８３逦：？：？：逦？；？；？邋ｒ＾－ｉ逡逑ｉｏ逦产逡逑0邋Ｉ逦灥丨：：：：ｌｌ逦W逦W丨画逦＿逡逑Ｄａｙｌ逦ＤａｙＢ逦Ｄａｙ５逦Ｄａｙ７逡逑ｓ空白对照组□模型对照组□给药组逡逑图３条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退阶段的僵直反应时间逡逑实验结果表明：在条件性恐惧记忆消退阶段，各组实验动物的僵直反应时间逡逑均逐渐减少；与空白对照组比较

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本文编号：2810000