青钱柳叶水提物对阴虚内热型糖尿病大鼠的调节作用研究

发布时间：2020-09-02 13:16

　　目的:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种代谢疾病,其特点是胰岛素分泌绝对不足或者相对不足引起的高血糖症,中医辩证为“消渴症”。青钱柳叶(Cyclocarya paliurus,CP)具有清热消肿解毒的功效,近年来其降血糖、降血压等作用引起了人们的关注。中医辩证消渴症一般分为阴虚燥热、阴虚内热、气阴两虚和阴阳两虚四种类型,其中阴虚内热型是最常见的一种。本论文通过高脂饲料+甲状腺素(Thyroxin,T4)+多次小剂量注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立阴虚内热型糖尿病大鼠模型,并观察青钱柳叶水提物治疗阴虚内热型糖尿病的作用,初步探讨其作用机理。为中药青钱柳叶用于阴虚内热型糖尿病的治疗提供更多的实验依据。方法:一、模型制备SD大鼠,给予高脂饲料喂养(正常组给予普通饲料),第3周,除正常组外,每组动物均皮下注射T4 0.2 mg/kg/d,连续7天。第4周,腹腔注射25 mg/kg STZ溶液;正常组腹腔注射同等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。注射STZ后第3天,动物禁食测空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG),以FBG≥7.8 mmol/L及出现阴虚内热表征作为阴虚内热型糖尿病大鼠模型建立标准。二、分组及给药将造模动物随机分为模型组,阳性组(知柏地黄丸组(1.5 g/kg/d)、二甲双胍组(0.125 g/kg/d)),青钱柳叶水提物高(26.4 mg/kg/d)、中(13.2 mg/kg/d)、低(6.6 mg/kg/d)剂量组。灌胃给药4周(1天/次)。正常组,模型组给予等体积的蒸馏水。给药期间,模型组及给药组继续饲以高脂饲料,正常组饲以普通饲料。三、指标检测(一)阴虚内热症状检测1.表观指标:每周记录动物表征,动物行为、背部温度、眼睛神采、舌颜色、爪色、大便干硬情况。2.对阴虚症的改善作用:末次给药后,测血清中三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)、T4、环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)、环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate,c GMP)水平。3.对免疫功能的影响:末次给药后,取全血测定淋巴细胞亚群CD3、CD4和CD8水平。(二)糖尿病大鼠一般情况造模成功后,每周测定动物体重、摄食量、饮水量、尿量。(三)对肝功、肾功的影响末次给药后,测定血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、AST/ALT、尿素氮(Carbamide)、肌酐(Creatinine,Cre)水平。解剖取肝脏、肾脏,计算肝肾系数;取肝脏组织,HE染色观察其病理形态的改变。(四)糖脂代谢检测1.造模成功后,每周定期测定FBG水平。2.末次给药后,测定动物口服糖耐量(Oral glucose tolerance test,OGTT)、糖化血红蛋白水平、取肝脏组织,检测肝糖原含量。3.末次给药后,放免诊断试剂盒测血清胰岛素(insulin,INS)水平,并计算胰岛素敏感指数(Insulin sensitivity index,ISI)及胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IRI)。4.末次给药后,测血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、FFA的含量。(五)对Ins R、IRS-2基因表达的影响Q-PCR测定肝脏组织中胰岛素受体(insulin receptor,Ins R)、胰岛素受体底物(insulin receptor substrate-2,IRS-2)的基因表达。结果:一、阴虚内热型糖尿病模型大鼠建立造模后,大鼠出现明显的阴虚内热表现:活动次数增加、背部温度增加、舌色鲜红、爪色青紫、大便干硬、眼睛神采变暗(P0.01或P0.05);大鼠T3及c GMP水平明显升高,免疫功能异常(淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+水平紊乱)(P0.01或P0.05)。且模型动物体重明显减轻,摄食量、饮水量和尿量均明显增加(P0.01或P0.05);空腹血糖明显升高,口服糖耐量异常,肝糖原明显降低(P0.01或P0.05);胰岛素含量明显升高,ISI明显降低,HOMA-IR明显升高,表现为明显的胰岛素抵抗(P0.05),提示造模成功。二、青钱柳叶水提物对模型大鼠的阴虚症状的改善作用(一)阴虚内热表观指标:与模型组相比,在给药第四周时,青钱柳叶水提物各剂量组动物背部温度上升程度、舌色鲜红比率及爪色青紫程度均有所改善;活动次数有所减少、眼睛神采好转(P0.01或P0.05)。(二)c AMP、c GMP、T3、T4:给药各剂量组能明显降低c AMP的含量(P0.01或P0.05),对c GMP、c AMP/c GMP比值以及T3、T4无明显影响。(三)免疫功能指标:青钱柳叶水提物低剂量组能显著性降低CD4+/CD8+的数值(P0.05或P0.01);CD3+、CD4+、CD8+均无明显差异。三、青钱柳叶水提物对模型大鼠糖尿病指标改善作用(一)体重、摄食量、饮水量、尿量的变化与模型组动物相比,青钱柳叶水提物能显著性降低动物摄食量、饮水量、尿量(P0.01或P0.05);对体重无明显影响。(二)肝、肾功能的影响与模型组相比,青钱柳叶水提物各给药组均能明显降低血清中尿素氮的含量(P0.01);中、低剂量组肝脏系数显著性增加(P0.01);其余各指标无明显差异;各给药组能改善肝脏的病理形态的损伤。(三)糖脂代谢方面1.给药第二周起,青钱柳叶高、低剂量组均能显著降低动物的FBG(P0.01或P0.05)。2.给药第四周后,高、低剂量组均能显著降低OGTT。3.青钱柳叶水提物中剂量组能显著性降低INS含量(P0.05);显著性增加ISI(P0.05)、降低HOMA-IRI(P0.05)。4.本实验中青钱柳叶水提物对脂代谢无明显影响。四、青钱柳叶水提物对模型大鼠肝脏组织Ins R、IRS-2基因表达的影响青钱柳叶各剂量组均能显著性增加Ins R、IRS-2 m RNA表达水平。结论:通过高脂饲料+甲状腺素+STZ的方法,可成功建立阴虚内热型糖尿病大鼠模型;青钱柳叶水提物能改善模型动物的阴虚内热证候、“三多一少”症状及肝脏的病理形态的损伤程度;空腹血糖、口服糖耐量、AUC、胰岛素抵抗均有明显改善,其作用机制可能与增加肝脏内Ins R、IRS-2表达有关。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

死亡率,诊断标准

图 1-1. 糖尿病流行病学（花费及死亡率）Fig1-1. Epidemiology of diabetes（expenditure and number of deaths）二、糖尿病的诊断目前比较广泛的认识是 WHO 提出的统一诊断标准[35]，即空腹血浆葡萄糖（FPG）

信号转导通路,胰岛素,2型糖尿病,基因突变

图 1-2. 胰岛素信号转导通路Fig1-2. Insulin signaling pathway）InsR、IRS-2 与 2 型糖尿病nsR 数目、亲和力降低以及基因突变和缺失

糖尿病大鼠

图 2-1 CP 对阴虚内热型糖尿病大鼠免疫功能的影响Fig 2-1 Effects of CP on model rats immune function六、小结

【参考文献】