肝苏颗粒对肝纤维化影响的实验研究

发布时间：2020-09-08 17:42

　　目的:肝苏颗粒是由苗药赶黄草开发的治疗肝炎的中成药。本研究拟探讨其对肝纤维化的药效作用及其机制。方法:1.化学性肝纤维化大鼠试验:选择健康成年SD大鼠,采用CCl_4灌胃合高脂高胆固醇低蛋白饲料喂饲法建立大鼠化学性肝纤维化模型。按体重随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组(0.0001g/kg)、和肝苏颗粒高、中、低剂量组(16.7、8.4、4.2g/kg)。灌胃给药9周,观察大鼠一般状态。末次给药后各组大鼠股动脉取血,测定血清ALT、AST、TBIL、ALP、ALB、TP含量或活性;并取肝、脾称重计算脏器系数;采用ELISA法测定肝组织中HA、LN、MMP-1及TIMP-1含量;另取部分肝组织行HE染色、Masson染色观察组织病理学变化;免疫组织化学法(SABC法)检测肝组织内α-SMA、TGF-β_1的表达情况。2.免疫性肝纤维化大鼠试验:选择健康成年SD大鼠,采用猪血清腹腔注射法造大鼠免疫性肝纤维化模型;参照前法分组、灌胃给药10周,观察大鼠一般状态,实验末取血测定血清ALT、AST、TBIL、ALP、ALB、TP含量或活性;取肝、脾称重计算脏器系数,ELISA法测定肝组织HA、LN、MMP-1、TIMP-1、PCⅢ、α-SMA及TGF-β_1含量,另取部分肝组织行HE染色及Masson染色观察组织病理学形态变化。3.胆管阻塞性肝纤维化大鼠试验:采用胆总管结扎法建立大鼠胆管阻塞性肝纤维化模型,并按体重随机分为模型对照组、秋水仙碱组(0.0001g/kg)和肝苏颗粒组(16.7g/kg),另设假手术组,灌胃给药8周后,检测各组大鼠肝功能和肝组织病理学变化。结果:1.肝苏颗粒抗大鼠CCl_4致肝纤维化实验结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠ALT、AST、TBIL、ALP明显升高,TP明显下降(P0.01),肝组织HA、LN、TIMP-1水平明显升高(P0.01),肝、脾系数显著升高而胸腺系数降低(P0.01);肝脏质地变硬,病理学检测见典型假小叶形成,免疫组化检测显示肝组织TGF-β_1、α-SMA表达明显增强。与模型对照组比较,秋水仙碱组和肝苏颗粒各组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL水平和肝组织中HA、TIMP-1水平均显著下降,血清球蛋白明显增加(P0.01),肝苏颗粒低剂量组的血清ALB含量明显增加(P0.05);病理学检测显示各给药组纤维化程度有不同程度改善,肝组织TGF-β_1、α-SMA表达减弱。2.肝苏颗粒抗大鼠免疫性肝纤维化实验结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL水平明显升高,ALB含量明显下降,肝脾系数均显著升高,胸腺系数显著降低,肝组织HA、LN、PCⅢ、TIMP-1,α-SMA、TGF-β_1含量明显升高(P0.05或P0.01),肝脏质地变硬,病理学检测见大量纤维化增生改变及假小叶形成。与模型对照组比较,各给药组血清ALT、AST、ALP、TBIL均明显下降,肝组织HA、LN、PCⅢ和TIMP-1水平明显降低,肝苏颗粒高,低剂量组还明显降低肝脏系数,低剂量组还可降低脾脏系数,秋水仙碱组及肝苏颗粒中剂量组α-SMA、TGF-β_1水平和肝苏颗粒低剂量组TGF-β_1水平均明显降低,以上差异有统计学意义(P0.05或P0.01);各给药组纤维化程度有不同程度改善。3.肝苏颗粒抗大鼠胆总管阻塞性肝纤维化的实验结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL球蛋白水平明显升高,肝脏系数显著升高,ALB含量及白球比值均明显下降(P0.05或P0.01),HE显示肝组织出现轻至中度的纤维化。与模型对照组比较,秋水仙碱组和肝苏颗粒组血清ALT、AST、TBIL、ALP、DBIL及球蛋白含量均明显下降,肝脏系数降低,秋水仙碱组的脾脏系数也明显降低(P0.05或P0.01),ALB含量及白球比值有增加。病理学显示秋水仙碱组和肝苏颗粒组肝脏纤维化程度与模型对照组比较有所减轻。结论:肝苏颗粒对大鼠CCl_4致化学性肝纤维化模型、胆管阻塞性肝纤维化模型和免疫性肝纤维化模型均有治疗作用,可明显改善肝功能和减轻肝脏纤维化变,机制是减轻肝脏脂质过氧化损伤,抑制胶原蛋白沉积和促进胶原降解,从而减少细胞外基质沉积和降低α-SMA和TGF-β_1的表达。
【学位单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

秋水仙碱,低剂量,HE染色

D E F图 1 肝苏颗粒对 CCl4致肝纤维化大鼠肝组织形态学的影响（HE 染色，100×；A．正常对照组；B．模型对照组；C．秋水仙碱组；D、F 分别为肝苏颗粒高、中、低剂量组）A B CD E F

秋水仙碱,低剂量,肝纤维化,给药

11D E F图 2 肝苏颗粒对 CCl4致肝纤维化大鼠肝组形态学的影响（Masson 染色，100×；A．正常对照组；B．模型对照组；C．秋水仙碱组；D、E、F 分别为肝苏颗粒高、中、低剂量组）对病变进行评分结果见下表 4。与正常对照组比较，模型对照组评分明显升高，差异有显著性意义(P＜0.01)。与模型对照组比较，各给药组评分都降低，肝苏颗粒中，低剂量和秋水仙碱可显著降低肝纤维化评分（P＜0.05 或 P＜0.01）。

秋水仙碱,低剂量,肝组织,免疫组化染色

成都中医药大学 2017 届硕士学位论文有少量表达；模型对照组 TGF-β1阳性表达明显增强，广泛分布于变性的肝细胞，纤维化区，肝窦区，汇管区，血管壁及部分胆管细胞；肝苏颗粒各剂量组和秋水仙碱组 TGF-β1阳性表达量明显减少，以低剂量组效果最好，高，中剂量组表达稍强。结果见图 4。采用 image pro plus 6.0 进行两个因子表达的平均光密度AOD 测定，具体数值见表 6。结果提示，肝苏颗粒能明显减少 CCl4导致的肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA，TGF-β1的表达，以肝苏颗粒低剂量组效果最好。

【参考文献】