影响通脉方中三种难溶性成分纳米晶自稳定Pickering乳液制备的因素研究

发布时间：2020-09-08 19:25

　　药物纳米晶自稳定Pickering乳液(nanocrystals self-stabilized Pickering emulsions,NSSPE)是课题组首创的一种新型乳液,可提高难溶性成分的口服生物利用度。课题组前期分别以水飞蓟宾和葛根素为模型药,成功构建了NSSPE。但尚未深入研究影响NSSPE制备的主要因素。本课题以通脉方中三种难溶性有效成分葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸为模型药,研究药物-油相性质、水相pH、药物浓度(即在体系中固体微粒的浓度)、水油体积比等因素对NSSPE成型与稳定的影响,分析其原因,揭示影响NSSPE制备的重要因素。同时,通过药物分布、FIM、CLSM、SEM、DSC等研究对三种难溶性成分的NSSPE进行表征,揭示NSSPE的微观结构。具体研究内容和结果如下:(1)NSSPE的评价方法从以下4个方面对NSSPE进行评价:(1)外观:观察室温静置过程中乳液的外观变化,计算稳定指数;(2)离心稳定性:观察4000×g离心15 min后乳液的外观变化,测定乳液层在500 nm处的吸光度;(3)乳滴粒径:光学显微镜观察乳滴形态,拍摄照片,计数200个乳滴的粒径;(4)乳液层药物含量:HPLC测定新制备、放置14 d及离心后的乳液层药物含量,计算含量下降率。(2)药物-油相性质对NSSPE制备的影响选用Campul C8、Fabrafil M 1944 CS、肉豆蔻酸异丙酯、川芎油和橄榄油为油相,分别以葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸为固体微粒,高压均质法制备NSSPE,并进行评价。同时测定油相黏度、表面张力,药物的表面能,药物固体微粒的粒径、Zeta电位,药物在不同油相中的溶解度和logP,三相接触角等油-水性质,探寻药物-油相性质对制备的影响。研究发现,油相黏度、药物固体微粒的粒径和电荷对NSSPE的制备有重要影响:油相黏度过低,如肉豆蔻酸异丙酯的黏度接近于水,不利于成乳;固体微粒粒径过大和电荷过低,如阿魏酸微粒的粒径达数个微米,Zeta电位接近于0,不利于乳液的成型。此外,三相接触角对NSSPE的稳定也有一定影响;而溶解度、logP、油相表面张力、药物表面能等性质与乳液的构建可能无关。在此基础上,优选出川芎油:Fabrafil M 1944 CS=9:1(v/v)作为油相,进行后续实验。(3)水相pH对NSSPE制备的影响设置水相pH为5.0、7.0、9.0、11.0、11.5、12.0和13.0,分别制备葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,并进行评价。同时测定了各pH条件下三种药物固体微粒的粒径、Zeta电位和混悬液的pH,探究水相pH对NSSPE制备的影响及原因。研究发现,水相pH是影响NSSPE成型与稳定的又一个重要因素:三种药物的NSSPE均是在较强的碱性条件下更稳定。同时,三种微粒在碱性条件下所带电荷显著增多;阿魏酸和葛根素微粒在碱性条件下粒径更小,丹参酮ⅡA微粒的粒径变化不大。此外,碱性条件下油相的自乳化能力显著增强。由此推测,水相pH能通过影响固体微粒的粒径、电荷,以及油相的自乳化能力而影响NSSPE的构建。(4)药物浓度对NSSPE制备的影响分别设置不同的药物浓度,制备葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,并进行评价。同时测定不同浓度下固体微粒的粒径、Zeta电位和混悬液的pH,探究药物浓度对NSSPE制备的影响及原因。结果显示,浓度较大时,Pu-NSSPE会出现絮凝现象,FA-NSSPE分层加剧,乳层吸光度显著减弱,但TanⅡA-NSSPE受浓度影响较小。同时,增大浓度后,弱酸性的葛根素和阿魏酸微粒粒径增大、电荷减少,混悬液的pH也降低;但浓度对丹参酮ⅡA微粒的影响较小。由此推测,药物浓度能通过影响固体微粒的粒径、电荷和混悬液的pH而影响NSSPE的成乳及稳定性,且这种影响对具有一定酸碱性的药物可能更明显。(5)水油体积比对NSSPE制备的影响设置水油体积比为95:5,90:10,85:15,80:20和70:30,分别制备葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,探究水油体积比对NSSPE制备的影响。结果显示,随着油相比例的增大,三种药物NSSPE乳液层吸光度先增大再减小;析出的油相逐渐增多。说明,油相比例过大或过小,不利于乳液的构建与稳定。(6)三种难溶性成分NSSPE的制备和表征根据上述制备条件的考察结果,选择水相pH(水平为11.5和12.0)和水油体积比(水平为90:10和85:15),按照析因设计制备了4种工艺条件的葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,比较了乳液的稳定性和药物分布,并用FIM、CLSM、SEM和DSC对优选的NSSPE进行结构表征。在4种工艺中,工艺A(水相pH为11.5,水油体积比为90:10)制得的Pu-NSSPE,工艺D(水相pH为12.0,水油体积比为85:15)制得的TanⅡA-NSSPE,工艺C(水相pH为12.0,水油体积比为90:10)制得的FA-NSSPE室温放置90 d后仍具有很好的乳液外观和乳滴形态,粒径无明显变化,仅药物含量略有下降。葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸纳米晶在乳滴界面的吸附率分别为29.4%、84.4%和22.1%。FIM、CLSM、SEM测定结果证实,三种药物的纳米晶均可吸附于川芎油-Fabrafil M 1944 CS的油滴表面。DSC证实,相对于原料药,吸附于乳滴界面的药物纳米晶,晶型可能发生了变化。本课题通过比较各种因素对葛根素、丹参酮ⅡA和阿魏酸NSSPE成型与稳定的影响,初步揭示了影响NSSPE制备的重要因素及其机制,可为其他中药难溶性成分的NSSPE的制备提供参考。
【学位单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R283.6
【部分图文】：

曲线,葛根素,曲线,进样

图 1-2 葛根素的标准曲线Fig. 1-2 The standard curve of puerarinSSPE 样品，按 2.4.1（2）项下的方法制备 6 （1）项下的色谱条件进样分析，分别测定葛葛根素含量见表 1-2。可见，6 次测定的 RSD 值求。表 1-2 重复性试验结果Table 1-2 The results of repeatability test5.0 和 125.0 μg·mL-1对照品溶液，每天进样三次1 2 3 4 5 6 L-13.88 3.90 3.97 3.91 3.85 4.02

色谱,丹参酮ⅡA,色谱

图 1-3 丹参酮ⅡA 的色谱图. a.对照品溶液；b.阴性样品溶液；c.供试品溶液.Fig. 1-3 Chromatograms of tanshinoneⅡA. a. standard solution；b. negative solution；c. testingsolution3.2.3 线性与范围精密吸取丹参酮ⅡA 对照品储备液 0.01、0.05、0. 25、1.25 和 6.25 mL，甲醇定容至 10 mL，得浓度分别为 0.08、0.4、2.0、10.0 和 50.0 μg·mL-1的对照溶液。按 2.4.2（1）项下的色谱条件进样分析。以对照品溶液浓度为横坐标（X），丹参酮ⅡA 峰面积为纵坐标（Y），计算线性方程。不同浓度丹参酮ⅡA 对照品溶液的色谱峰面积见表 1-5，标准曲线见图 1-4。可见，丹参酮ⅡA 浓度在 0.08~50.0 μg·mL-1范围内，与色谱峰面积的线性关系良好，线性方程为：Y=61.544X +5.4842，r=1。表 1-5 丹参酮ⅡA 的标准曲线结果Table 1-5 The data of standard curve of tanshinoneⅡA对照品溶液浓度 / μg·mL-10.08 0.4 2.0 10.0 50.0

阴性,丹参酮ⅡA,溶液,色谱峰面积

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