血人参化学成分及其保肝活性研究

发布时间：2020-09-10 17:09

　　 目的:对血人参乙酸乙酯部位化学成分进行研究,并对分离得到的化合物进行体外保肝活性筛选。然后再对具有保肝活性的化合物2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)的保肝作用进行研究。方法:1.利用硅胶柱层析、MCI色谱柱、Sephadex LH-20、反相C18色谱柱、高效液相色谱法等不同色谱方法及技术进行活性单体化合物的分离,并根据其理化性质、波谱数据进行结构鉴定;2.利用最佳损伤浓度和时间的对乙酰氨基酚(APAP)诱导人的正常肝细胞(HL-7702细胞)损伤,建立肝细胞体外损伤模型,并对分离得到的化合物进行体外保肝活性筛选,四氮唑盐还原法(MTT法)检测细胞吸光度值,计算细胞存活率;3.取对数生长期HL-7702细胞按照1×10~5个/mL浓度接种到6孔板中,每孔2 mL。实验分为3组,空白对照组;APAP损伤组;药物保护组(40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)。置于37~oC、5%CO_2培养箱中培养24 h。待细胞完全贴壁后空白组和模型组更换新的完全RPMI 1640培养液,药物保护组更换为相应浓度的含药培养液,继续培养12h后,除对照组外,其余各组加入最佳损伤浓度APAP溶液,作用12 h后,分别收集各组细胞上清液用于检测还原性谷胱甘肽(GSH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)等指标,研究化合物11保肝作用。结果:1.从血人参乙酸乙酯部位共分离鉴定了11个化合物,经结构鉴定确定为:β-sitosterol-D-glucoside(1),五味子苷(2),山萘酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),豆甾醇(4),3,4,5-trimethoxy phenyl-O-β-D-Glucopyranoside(5),2-methoxy-4-(2'-hydroxyethyl)-phenol-1-O-β-D-glucopyranoside(6),2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl1-O-β-D-glucopyranosi de(7),高丽槐素(8),7-hydroxy-2-(4'-methoxyphenyl)chroman-4-one(9),毛蕊异黄酮(10),2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)。其中化合物5、化合物6、化合物7、化合物9为首次从豆科植物中分离得到;化合物3、化合物10为首次从木蓝属植物中分离得到;化合物1为首次从血人参药材中分离得到。2.经过体外活性筛选,发现化合物2、9、10、11对AP AP诱导的人肝HL-7702细胞损伤具有保护作用,细胞存活率明显升高;3.与模型组相比化合物11能够使APAP诱导HL-7702肝细胞损伤模型中ALT、AST活性降低(p(27)0.05),MDA含量降低(p(27)0.05),GSH含量升高(p(27)0.01)。结论:1.本研究在已有研究的基础之上进一步丰富和完善了血人参的化学成分研究;2.化合物2、9、10、11在体外对对乙酰氨基酚诱导的人肝细胞HL-7702损伤具有保护作用,其中化合物10和化合物11保肝活性更好;3.化合物11对APAP诱导的人肝HL-7702细胞具有保护作用其保护作用可能是通过降低细胞中ALT、A ST活性降低,使MDA含量降低,GSH含量升高从而发挥其保肝活性。
【学位单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

图 1.3 化合物 1 结构Figure 1.3 structure of compound 1化合物 2 白色针状结晶(DMSO); ESI-MS m/z 491 [M H] ;1H NMR (500MHz，CD3OD) δ: 6.73 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2'), 6.69 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'),6.60 (1H, s, H-2), 6.58 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6'), 6.12 (1H, s, H-5), 4.01 (2H,m, H-9), 3.93 (1H, dd, J = 9.8, 2.4 Hz, H-1''), 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-7'), 3.76(3H, s, 3'-OCH3), 3.75 (3H, s, 3-OCH3), 3.67 (2H, m, H-9'), 3.41 (2H, m, H-5''),3.16 (2H, m, H-2'', 3''), 3.07 (1H, m, H-4''), 2.77 (2H, m, H-7), 2.02 (1H, m, H-8'),1.80 (1H, t, J = 10.4 Hz, H-8).13C NMR (126 MHz, CD3OD) δ: 148.92 (C-3'),147.15 (C-3), 145.83 (C-4'), 145.13 (C-4), 138.63 (C-1'), 134.31 (C-6), 129.10

州医科大学 2019 届科学学位硕士研究生学位论文具有 ABX 偶合系统的苯环，δ 6.60 (1H, s, H两个氢质子信号，δ 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H的氢信号表明结构中含有一个β构型的糖。给出 12 个芳香碳信号，猜想存在两个苯环δ 77.91、δ 75.00、δ 71.26、δ 69.38 四个连氧，另外还有 8 个脂肪族碳信号，其中δ56.43其余6个中，δ 66.91和δ 65.09为两个连氧的碳δ 33.85 为四个 SP3类型的碳信号，说明该化波谱数据同文献[15]核对基本一致，确定该化）。

图 1.6 化合物 4 结构Figure 1.6 structure of compoun粉末（甲醇）：1H NMR (500 MHz, CD3Oz, 2H, H-1', 2'), 3.91 (dd, J = 12.0, 2.2 Hz3H, 4-OCH3), 3.65 (dd, J = 12.0, 6.7 Hz, (126 MHz, CD3OD) δ: 156.07 (C-5), 1 96.03 (2C-2, 6), 78.43 (C-5'), 78.06 (C-1.21 (4-OCH3), 56.51 (3, 5-OCH3). 波谱物 3,4,5-trimethoxyphenyl-β-D-ylucopy

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本文编号：2816082