鬼针草石油醚部位抗癌物质基础研究

发布时间：2020-09-11 10:14

　　 鬼针草(Bidens pilosa L.)系菊科鬼针草全草,具有活血散瘀,清热解毒的作用。鬼针草在民间常用于治疗多种癌症,但关于其抗癌物质基础的研究报道不多,其抗癌活性部位、药效作用及机制缺乏研究,质量控制方法也有待完善。鉴于此,本文首先对鬼针草进行初步提取、分离和活性部位筛选,对筛选出的部位进行GC-MS分析,随后对活性较强的石油醚部位进行体内抗癌药效及作用机制研究,最后研究建立了鬼针草的HPLC-UV指纹图谱分析方法。通过上述研究,以期为鬼针草的抗癌药用开发奠定基础。本文的主要研究内容及学术贡献如下:1鬼针草的初步提取分离及体外抗肿瘤活性筛选首先采用75%乙醇提取鬼针草,制备总提物,分别依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到四个萃取部位;采用人肝癌HePG-2、肺癌A549及鼻咽癌CNE细胞对上述部位进行体外抗癌活性筛选(MTT法),结果显示,石油醚部位对上述三种肿瘤细胞的增殖抑制活性最好,尤其是对肺癌A549细胞的作用最强(IC50=52.83±0.02μg/mL)。2鬼针草活性部位的质谱分析研究采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析石油醚部位,通过NIST library2002谱库(美国)检索及面积归一化法,鉴定出34个成分并获得相关含量信息,为后续研究提供了参考。3鬼针草石油醚部位的体内抗癌药效学研究采用人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,设置低(90 mg/kg)、中(180 mg/kg)、高(360 mg/kg)剂量组,研究鬼针草石油醚部位的体内抗癌作用。结果显示,石油醚部位对A549实体瘤的增殖抑制作用呈剂量依赖关系,其中,高剂量组抑制作用最强,达到50%。上述结果证实,鬼针草石油醚部位确实具有一定的抗肿瘤活性。4鬼针草石油醚部位的抗癌药效机制初步研究采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关基因的表达变化,研究石油醚部位体外干预A549癌细胞后Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果显示,石油醚部位体促进了Caspase-3、Bax蛋白的表达,同时降低了Bcl-2蛋白的水平,且作用呈明显的剂量依赖性。上述结果表明,鬼针草石油醚部位可能通过细胞凋亡途径发挥抗癌药效作用。5鬼针草的HPLC指纹图谱分析方法研究开展鬼针草HPLC-UV指纹图谱的方法研究。对10批不同产地的鬼针草药材进行HPLC-UV分析,找出11个共有峰,建立了鬼针草的HPLC-UV谱图;不同产地鬼针草药材质量存在一定差异,除安徽和广西产地的鬼针草外,其他8个地区鬼针草的相似度都在80%以上。上述结果表明,所建立的HPLC-UV指纹图谱分析方法可以用来分析鬼针草的质量。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：

图 1.2 鬼针草四个萃取部位对肺癌细胞 A549 的抑制率曲线图Fig 1.2 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of A549 in vitro

图 1.2 鬼针草四个萃取部位对肺癌细胞 A549 的抑制率曲线图Fig 1.2 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of A549 in vitro

图 1.4 鬼针草四个提取部位对鼻咽癌细胞的抑制率曲线图Fig 1.4 Inhibitory effects of ethanol extract from Bidens pilosa L on the growth of CNE in vitro1.4 讨论MTT 法是检测细胞是否存活的方法之一，常被运用于各类肿瘤细胞药敏实验。其原是：新陈代谢活跃的细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶沉积在细胞中，使外源性 MTT 还原蓝紫色的甲佨沉淀，而死细胞不能产生甲佨沉淀，通过联系甲佨与活细胞数量即可获得细胞数量。在实验中，用 DMSO 溶解沉淀后，通过酶标仪在一定波长下测定其吸光度，可间接反映细胞活性。本章通过乙醇回流提取法获得鬼针草粗提物，通过不同极性溶液萃取获得四个萃取位（石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位）进行体外抗肿瘤活性筛选。果表明，四个萃取部位对人肝癌 HePG-2 细胞、人肺癌 A549 细胞和人鼻咽癌 CNE 细胞

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本文编号：2816545