天麻酚性成分促血管新生及神经修复的作用研究

发布时间：2020-09-14 17:38

　　目的:通过体外和体内实验观察天麻酚性成分3#、4#、8#对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)后7d、14d大鼠血管内皮细胞生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)的表达及神经修复的影响,阐明天麻酚性成分促血管新生及神经修复的作用。方法:1.采用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)梯度离心的方法分离培养大鼠原代脑微血管内皮细胞(Brain microvascular endothelial cells,BMECs),以Matrigel为细胞支架,进行体外成环实验,考察3#、4#、8#对体外小管形成的影响,初步筛选具有促血管新生作用的天麻酚性成分。2.复制大鼠脑缺血再灌注损伤(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,灌胃给予相应受试物,每天一次,连续给药7d和14d(下同),并于再灌注2h、给予受试物7d、14d采用Longa 5分法进行神经功能学评分;并于给受试物7d、14d后心脏取血,采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测3#、4#、8#对大鼠血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响;制作冰冻切片或提取蛋白,采用免疫荧光法和Western Blot法检测3#、4#、8#对MCAO/R大鼠大脑皮层及海马VEGF-A、神经核(Neuron nucleu,NeuN)、脑源性神经营养因子(Brain derived nerve growth factor,BDNF)表达及神经功能的影响。结果:1.3#、4#、8#对大鼠原代BMECs体外成环的影响3#、8#能明显促进内皮细胞体外成环(P0.01);4#组管腔个数有增加趋势,但差异没有统计学意义(P0.05)。2.3#、4#、8#对再灌注2h、给予3#、4#、8#7d、14d大鼠神经功能的影响再灌注2h各组模型大鼠均出现神经功能缺失症,组间无差异。给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠神经功能缺失症状有改善的趋势,给予受试物14d大鼠神经功能缺失症状有明显改善。3.3#、4#、8#对大鼠脑皮层及海马VEGF-A表达的影响(免疫荧光法)给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠大脑皮层VEGF-A阳性细胞明显增多,海马VEGF-A阳性细胞有增多的趋势;给予受试物14d大鼠大脑皮层、海马VEGF-A阳性细胞均明显增多。4.3#、4#、8#对大鼠大脑VEGF-A表达的影响(Western Blot)给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d的4#、8#组,14d的8#组大鼠大脑VEGF-A表达明显升高。给予受试物7d的3#组、14d 3的#、4#组大鼠大脑VEGF-A表达有升高的趋势。5.3#、4#、8#对大鼠外周血VEGF分泌的影响给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d的8#组大鼠VEGF含量增加,给予受试物7d的4#组、14d的4#组、8#组大鼠VEGF的含量有升高的趋势。6.3#、4#、8#对大鼠脑皮层及海马NeuN表达的影响(免疫荧光)给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠大脑皮层NeuN阳性细胞明显增多,各组海马NeuN阳性细胞有增多的趋势。给予受试物14d 3#、4#、8#组大鼠大脑皮层、海马NeuN阳性细胞均明显增多。7.3#、4#、8#对大鼠大脑Neu N和BDNF表达的影响(Western Blot)给予天麻酚性成分3#、4#、8#7d、14d大脑NeuN表达有升高的趋势,给予受试物7d的3#、4#组,14d的3#、4#、8#组大鼠大脑BDNF表达明显升高。结论:3#、8#能促进BMECs体外成环,具有促体外血管新生作用。天麻酚性成分3#、4#、8#能促进MCAO/R大鼠血管新生和神经修复。
【学位单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5

【引证文献】