平喘宁调控PI3K-Akt信号通路相关蛋白PKC、FKHR、Bad的表达干预哮喘的作用机制研究

发布时间：2020-09-15 15:23

　　目的:探讨平喘宁调节肺组织中PI3K-Akt信号通路相关蛋白治疗寒性哮喘大鼠的作用机制。通过免疫组化、RT-qPCR等方法来检测平喘宁干预后PI3K-Akt信号传导通路中P21CIP1、P27KIP1、Bad、FKHR、PKC的表达水平的变化,来研究平喘宁对寒性哮喘大鼠的影响及作用机制。方法:把105只健康的SD雄性大鼠(6-8周,180-230g重)随机分为7组,15只一组。七组为正常组、模型组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组、桂龙咳喘宁组以及地塞米松组。适应性饲养后,除正常组外,其余各组在第1天和第8天进行致敏,以卵蛋白和生理盐水配制成10%卵蛋白溶液,对大鼠进行腹腔注射,每只1ml,正常组的大鼠注射1ml生理盐水。第15天,对正常组外的各组以1%的卵蛋白溶液进行雾化,同时给予寒冷刺激,每天1次,每次30分钟,连续一周。第22天,对大鼠进行灌胃治疗,各药物组给予相应药物,模型组和正常组给予同容量的生理盐水,连续四周。灌胃结束后,再进行一次1%卵蛋白超声雾化及寒冷刺激,在2小时内,对大鼠进行麻醉解剖,取肺组织,左肺置于福尔马林中固定,右肺放入冻存管中放进-80℃冰箱保存。用HE染色法检测大鼠肺组织的病理改变,用RT-qPCR法检测肺组织中Bad、FKHR、PKCmRNNA的表达水平,用免疫组化法检测肺组织中P21CIP1、P27KIP1的表达水平。结果:病理检测结果显示,相较于正常组,模型组大鼠支气管结构明显紊乱,气道上皮细胞脱落,管壁明显增厚,黏膜充血,有炎性细胞浸润等现象,各治疗组皆有不同程度的病理变化;和模型组相比,各治疗组肺组织的病理变化程度得到改善。免疫组化检测结果显示:与正常组相比,其他各组大鼠肺组织P21CIP1、P27KIP1表达水平均有显著统计学差异(P0.01);与模型组相比,各给药组大鼠肺组织P21CIP1、P27KIP1表达皆有显著统计学差异(P0.01)。其中平喘宁高剂量组对于P21CIP1、P27KIP1的作用效果相较于其他组较佳。RT-qPCR检测结果显示,与正常组相比,其他各组大鼠肺组织PKCmRNA、FKHRmRNA、BadmRNA表达水平均有显著统计学差异(P0.01);与模型组相比,各给药组大鼠肺组织PKCmRNA、FKHRmRNA、BadmRNA表达皆有显著统计学差异(P0.01)。其中平喘宁高剂量组对于PKC、FKHR作用效果优于其他治疗组(P0.01),平喘宁高剂量组和地塞米松组对于Bad作用效果优于其他治疗组(P0.01)。结论:平喘宁能够升高信号通路PI3K-Akt中P21CIP1、P27KIP1蛋白表达水平以及Bad、FKHRmRNA表达水平,降低PKCmRNA表达水平,减少炎性细胞浸润,减轻炎症反应,抑制寒哮大鼠肺组织气道平滑肌增殖,从而减缓气道重塑,治疗哮喘。
【学位单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

模塞,管壁,气道上皮细胞,平度

桂龙咳喘宁组图 1 各组大鼠肺组Fig 1 HE staining of lung tiss从上图可以看出 HE 染色后，正常组细胞浸润，管壁无明显增厚。与正常组相紊乱，气道上皮细胞脱落，管壁明显增给药组皆有不同程度的病理变化。与模塞米松组、桂龙咳喘宁组大鼠肺组织的药物都有不同程度的改善，其中地塞米物，两组的病理表现皆有明显改善，黏相对完整；平喘宁组也都有显著改善，平度要高于平喘宁低剂量组。

免疫组化检测,组图,大鼠

免疫组化检测各组大鼠

地塞米松,低剂量,给药,蛋白表达

图 3 各组大鼠肺组织 P27KIP1 蛋白表达量比较Fig 3 Comparison of P27KIP1 protein expression in lung tissue of rats in each group由表2中各组数据以及图2、图3可以看出：与正常组相比，其他各组P27KIP1蛋白表达水平均有显著统计学差异（P<0.01）；与模型组相比，各给药组 P27KIP1表达皆有显著统计学差异（P<0.01）。平喘宁高剂量组 P27KIP1 表达水平高于桂龙咳喘宁组、地塞米松组和平喘宁中、低剂量组（P<0.01）。结果表明，各药物组对于大鼠肺组织 P27KIP1 蛋白表达有影响，其中平喘宁高剂量组的效果更佳。

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