百合地黄汤治疗失眠的作用机制研究

发布时间：2020-09-16 16:24

　　 失眠是一种常见的睡眠障碍性疾病,对人们的生活造成了严重的影响,很多中药治疗失眠均有较好的疗效,百合地黄汤源于《金匮要略》,是治疗失眠的经方,但其作用机制尚不明确,本课题在优化百合地黄汤最佳提取工艺的基础上,研究百合地黄汤治疗失眠的作用机制,并筛选百合地黄汤治疗失眠的最佳有效部位。本课题进行以下实验:(1)采用正交设计,以乙醇浓度、溶剂倍量、浸泡时间、提取时间为考察因素,每个因素选取3个水平,以百合地黄汤中梓醇含量和浸膏得率为评价指标,采取综合加权评分法对实验结果进行分析。结果表明百合地黄汤的最佳提取工艺为12倍量50%乙醇浸泡90min,提取60min,梓醇含量和浸膏得率较高,且经验证实验,工艺稳定可行,可用于后续研究中。(2)采用腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、地西泮组、百合地黄汤低、中、高剂量组,另设空白组,连续给药7d,采用旷场实验测定行为学评分,翻正反射实验评价百合地黄汤对大鼠睡眠时间的影响;建立大鼠脑部单胺类神经递质的HPLC-ECD测定方法,并采用该法检测大鼠皮层、脑干和海马中DA、5-HIAA、HVA和5-HT的含量。与空白组相比,模型组大鼠体重和旷场得分明显降低(p0.05),中央格停留时间、修饰次数、粪便颗粒数及睡眠潜伏期等指标明显升高(p0.05),模型组大鼠不同脑区中DA含量明显升高,5-HT含量明显降低(p0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠的中央格停留时间、修饰次数和粪便颗粒数明显降低(p0.05),大鼠的睡眠潜伏期缩短,且百合地黄汤组大鼠的睡眠持续时间明显延长(p0.05),百合地黄汤组大鼠皮层中DA含量明显降低(p0.05),地西泮组和百合地黄汤低剂量组大鼠皮层、脑干和海马中5-HT含量明显升高(p0.05),百合地黄汤中、高剂量组大鼠脑干和海马中5-HT含量升高(p0.05);空白组、模型组、地西泮组大鼠皮层中DA含量较高,可以检出HVA,其余各组均未检出。结果表明百合地黄汤可改善失眠模型的大鼠行为学和睡眠,对大鼠脑部单胺类神经递质的调节作用可能是其治疗失眠的作用机制。(3)建立大鼠血清中氨基酸类神经递质的LC-MS/MS测定方法,并采用该法检测大鼠血清中Glu和GABA的含量。与空白组相比,模型组大鼠血清中GABA、Glu含量无明显变化,Glu和GABA的比值显著升高(p0.01);与模型组相比较,地西泮组、百合地黄汤中剂量组和百合地黄汤高剂量组大鼠血清中Glu/GABA的比值明显降低(p0.05)。结果表明百合地黄汤发挥治疗失眠的作用与调节大鼠体内抑制性神经递质GABA和兴奋性神经递质Glu的含量密切相关。(4)百合地黄汤提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取,分离得不同萃取部位,以果蝇失眠模型筛选镇静催眠的最佳有效部位,并研究其对果蝇脑部DA、5-HIAA、HVA和5-HT含量的影响。与空白组相比,模型组果蝇的睡眠时间显著缩短(p0.01),果蝇脑部DA含量明显升高(p0.05),5-HIAA和5-HT的含量明显降低(p0.05);与模型组相比,百合地黄汤全方组、石油醚部位低剂量组、二氯甲烷部位中剂量组、乙酸乙酯部位中剂量组、水饱和正丁醇部位低剂量组果蝇睡眠时间明显延长(p0.05),各提取部位组果蝇脑部的DA和HVA含量降低,5-HT和5-HIAA含量升高,二氯甲烷部位对果蝇睡眠和果蝇脑部单胺类神经递质的调节作用最为明显。本课题首次以果蝇为模式生物筛选百合地黄汤治疗失眠的最佳有效部位,结果表明百合地黄汤治疗失眠的最佳有效部位为二氯甲烷部位,各提取部位对果蝇脑部单胺类神经递质含量具有一定的调节作用。
【学位单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;R285.5
【部分图文】：

１０卟、１２队、１５（＿ｉＬ、１８｜ｉＬ，测定梓醇的峰面积，以色谱峰面积为纵坐标（Ｙ），对逡逑照品的质量（叩）为横坐标（Ｘ）绘制标准曲线，其回归方程为Ｙ＝６２１０６８．３１Ｘ－２０４９．６４，逡逑Ｒ２＝０．９９９９，梓醇在０．０３？０．１８丨ｉｇ范围内具有良好的线性关系。标准曲线见

取不同浓度的混合对照品溶液，分别进样５邋ｐＬ。以对照品的质量（Ｘ）为横坐标、逡逑峰面积（Ｙ）为纵坐标进行回归分析，各项线性关系均良好。结果见表９，标准曲线见逡逑图４。逡逑表９线性关系考察结果逡逑Ｔａｂｌｅ邋９邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ逡逑成分逦线性范围／ｎｇ逦线性方程逦Ｒ２值逡逑ＤＡ逦０．１５邋？４．８０逦Ｙ＝７５８５３８Ｘ－４６７２６逦０．９９９９逡逑５－ＨＩＡＡ逦０．０７５？２．４０逦Ｙ＝１６７４７４４．４８Ｘ－１１５８８７．８１逦０．９９９３逡逑ＨＶＡ逦０．２０邋？６．４０逦Ｙ＝５７４４３４Ｘ－１８０５６逦０．９９９８逡逑５－ＨＴ逦０．１２５邋？４．００逦Ｙ＝１５４９８５８．１７Ｘ－１５６９６０．３１逦０．９９９９逡逑４００００００１逦Ｙ＝７５８５３８Ｘ－４６７２６逡逑Ｒ２＝０．９９９９逦ｙ逡逑３００００００－逡逑＜２００００００－逡逑１００００００－邋＾逡逑，逡逑０逦２逦４逦６逡逑ｍ／ｎｇ逡逑Ａ逡逑４４逡逑

外加氨基酸的质量浓度为横坐标（Ｘ），以外加氨基酸峰面积与内标物峰面积比值为纵逡逑坐标（Ｙ），进行回归分析，ＧＡＢＡ、Ｇｌｕ的线性关系良好。结果见表１５，标准曲线见逡逑图６。逡逑表１５线性关系考察结果逡逑Ｔａｂｌｅ邋１５邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ逡逑成分逦线性范围线性方程逦Ｒ２值逡逑ＧＡＢＡ逦２邋？８０００逦Ｙ＝０．０００１Ｘ＋０．０５１０逦０．９９５２逡逑Ｇｌｕ逦５邋？１６０００逦Ｙ＝０．０００１Ｘ＋０．０３８２逦０．９９８２逡逑５６逡逑

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本文编号：2820077