龙葵有效成分的提取分离及抗肿瘤作用的研究

发布时间：2020-09-17 18:12

　　目的通过CCK-8实验筛选龙葵最佳提取分离方式,研究龙葵提取物对肠癌DLD-1的体内、体外抗肿瘤作用机制。方法采用CCK-8法获得的细胞抑制率为参考,对龙葵的最佳提取溶剂与方式进行选择;以CCK-8实验选择龙葵的最佳分离方式;通过CCK8实验,细胞迁移实验,AO-EB双染色法实验和流式细胞法实验,研究实验所得龙葵提取物对肠癌DLD-1的增殖、迁移及凋亡的作用;通过免疫组织化学法研究龙葵提取物对裸鼠瘤体的作用。结果1.龙葵全草以80%乙醇溶液加热回流提取时,其提取物对肠癌DLD-1细胞产生的增殖抑制作用,在给药范围内,其最高抑制率可达85.5%,IC_(50)值为0.83mg/mL,因此,采用80%乙醇回流的提取方式作为最佳提取方式。当龙葵80%醇提取物经LSA-10大孔树脂洗脱时,50%醇洗脱物的IC_(50)值为1.056mg/mL,将LSA-10大孔树脂洗脱时,50%洗脱物作为最佳分离成分。2.龙葵提取物对结肠癌体外抗肿瘤作用研究:从CCK-8实验所得IC_(50)值可知,当细胞增殖抑制率为50%时,澳洲茄碱的给药浓度为0.86mg/mL,五氟尿嘧啶的浓度为0.46mg/mL,龙葵提取物的浓度为0.94mg/mL。细胞划痕实验证实各给药组均有抑制细胞迁移的能力。AO-EB双染色荧光显色法检测给药状态下细胞形态发现,空白对照组的细胞,呈现正常的细胞状态;龙葵提取物组的细胞呈现形态比较饱满,但数量有所减少的状态;澳洲茄碱组的细胞呈凋亡现象,且细胞数量减少;五氟尿嘧啶组的细胞,则细胞凋亡的比较严重,细胞数量明显减少。流式细胞法检测细胞凋亡率发现,各给药组均呈现诱导细胞凋亡的现象。3.龙葵提取物对结肠癌体内抗肿瘤作用研究:龙葵提取物,澳洲茄碱,联合给药以及五氟尿嘧啶可在一定程度上对裸鼠瘤体的质量和体积产生抑制作用。以免疫组织化学法对裸鼠瘤体组织切片染色反应后,其组织切片在光学显微镜下呈现大量的呈现棕色斑点或斑块,这是细胞显现阳性反应的现象。而在使用Image-Pro Plus图像分析软件对切片进行分析时发现,给药组的阳性表达率均小于空白对照组,结果表明,各给药组均对裸鼠瘤体有抑制作用。结论结合CCK-8实验,筛选出龙葵全草药材抗肿瘤活性成分的最佳提取和分离方式。对提取物进行体外抗肿瘤作用机制研究时发现,龙葵提取物在一定程度上,对肿瘤细胞的增殖迁移能力有抑制作用,使细胞的形态及数量发生变化,同时可诱导细胞凋亡。对提取物进行体内抗肿瘤作用机制研究发现,龙葵提取物对裸鼠瘤体质量和体积具有抑制作用,且其给药组呈现的阳性率相对较低。
【学位单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5;R284.2

【参考文献】