芍药苷减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤与慢性肝纤维化的实验研究

发布时间：2020-09-18 06:19

　　研究芍药苷(paeoniflorin)对四氯化碳(carbon tetrachloride)诱导的急性肝损伤与肝纤维化的保护作用及其机制。1.芍药苷对四氯化碳诱导的急性肝损伤的保护作用及其机制:目的:研究芍药苷对四氯化碳诱导的急性肝损伤的保护作用及相关机制。方法:将36只雄性C57BL/J小鼠随机分成6组:空白组,芍药苷对照组,四氯化碳模型组,低、中、高剂量芍药苷干预组,每组6只。空白组、四氯化碳模型组均以等体积生理盐水灌胃;芍药苷对照组给等量100 mg/kg的芍药苷灌胃;芍药苷低、中、高给药组分别按10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg灌胃给药。每8 h一次,连续给药3次,最后1次给药30 min后,四氯化碳模型组及芍药苷给药组均予10%四氯化碳橄榄油溶液5μl/g腹腔注射,造成急性肝损伤模型。24 h后收集血清及肝组织进行下一步检测。测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性。苏木精-伊红染色,观察肝脏病理学改变。酶标仪检测caspase-3的活性评价肝细胞凋亡情况。试剂盒检测肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量评价肝脏抗氧化能力。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量。逆转录定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测肝组织中血红素加氧酶-1 m RNA的表达。结果:与空白组相比,四氯化碳模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶水平升高;苏木精-伊红染色结果显示肝损伤程度明显,caspase-3活性检测表明肝细胞凋亡增加;肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;血清中炎性因子肿瘤坏死因子-α和白介素-6的表达升高。与四氯化碳模型组相比,芍药苷给药组呈剂量依赖性降低四氯化碳诱导的小鼠血清丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶水平;改善肝脏的病理形态并减轻肝细胞凋亡;芍药苷干预后可抑制四氯化碳诱导的肝脏氧化应激反应,肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性升高,丙二醛的含量降低,谷胱甘肽含量升高;显著降低四氯化碳诱导的炎性因子肿瘤坏死因子-α、白介素-6的表达;显著升高四氯化碳诱导肝组织血红素加氧酶-1的m RNA表达。结论:芍药苷可保护四氯化碳诱导的急性肝损伤,该保护作用可能与减少肝细胞凋亡,减轻氧化应激,减少促炎细胞因子产生,促进血红素加氧酶-1的表达有关。2.芍药苷对四氯化碳诱导的肝纤维化的保护作用及其机制:目的:研究芍药苷对四氯化碳诱导的慢性肝纤维化的保护作用及相关机制。方法:将24只雄性C57BL/J小鼠随机分成4组:空白组,芍药苷对照组,四氯化碳模型组,芍药苷给药组,每组6只。四氯化碳模型组及芍药苷给药组每周两次腹腔注射10%5μL/g的四氯化碳橄榄油溶液7周建立四氯化碳肝纤维化模型。芍药苷对照组和芍药苷给药组造模一周后按100 mg/kg灌胃给药,每日一次。7周后,收集小鼠血清与肝组织进行下一步检测。试剂盒测定血清丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶活性。苏木精-伊红染色,观察肝脏的病理学改变。马森染色、天狼星红染色及羟脯胺酸含量测定评价肝脏纤维化程度。检测肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性及丙二醛和谷胱甘肽含量评价肝脏抗氧化能力。酶联免疫吸附试验检测肝脏中肿瘤坏死因子-α、白介素-6的含量。逆转录定量聚合酶链式反应检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、desmin、vimentin、Ⅰ型胶原及血红素加氧酶-1m RNA的表达。免疫印迹分析肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型胶原及血红素加氧酶-1蛋白表达。酶标仪检测肝脏血红素加氧酶-1的活性。结果:与空白组相比,四氯化碳模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶的活性水平升高;肝小叶结构遭到破坏,纤维组织明显增生;肝脏纤维化程度加深;肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型胶原m RNA和蛋白表达增加;肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性降低,丙二醛的含量升高,谷胱甘肽含量下降;炎性因子肿瘤坏死因子-α、白介素-6的表达升高。与四氯化碳模型组相比,芍药苷给药组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶活性的水平明显下降;肝小叶结构破坏程度减轻,纤维组织明显减少;肝脏纤维化程度减轻;肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、desmin、vimentin、Ⅰ型胶原m RNA和蛋白表达下降;肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性升高,丙二醛的含量下降,谷胱甘肽含量升高;炎性因子肿瘤坏死因子-α、白介素-6的表达下调;肝脏中血红素加氧酶-1的活性升高,表达增加。结论:芍药苷可减轻四氯化碳诱导的肝纤维化,该保护作用可能与减轻肝脏氧化应激,减少促炎细胞因子产生,提高血红素加氧酶-1的活性,促进血红素加氧酶-1的表达有关。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

芍药苷,化学结构式,医科大学

图 1.芍药苷的化学结构式Fig 1.The structure of paeoniflorin法物性 C57BL/J 小鼠 60 只，体重 18-22g，由重庆医科大学公司t 南京建成生物工程研究t 南京建成生物工程研究

芍药苷,苏木精-伊红染色,空白

(A):ALT (B):AST*:与模型组相比 #:与空白组相比2 肝组织切片苏木精-伊红染色结果苏木精-伊红染色结果如图 3 所示，空白组和芍药苷对照组，肝小叶和肝清晰可见，肝细胞结构完整；四氯化碳组可观察到严重的弥漫性小叶中心，肝脏中可见大量炎性细胞浸润；而芍药苷给药组的小鼠肝细胞只有斑点，轻度炎症反应。说明芍药苷能有效减轻四氯化碳诱导的肝组织损伤。

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图 4. 芍药苷对四氯化碳诱导的小鼠肝脏细胞凋亡的影响Fig.4 The effect of paeoniflorin on hepatocytes apoptoisis**p< 0.01，##p< 0.*:与模型组相比 #:与空白组相比 MDA，GSH 含量与 SOD、CAT，GSH-PX 活性检测化碳在肝脏中代谢产生自由基引发脂质过氧化并最终导致肝毒了肝脏 MDA、GSH 含量及 SOD、CAT、GSH-PX 活性，评价化系统的影响。结果如表 9 所示，与空白组相比，四氯化碳模MDA 含量明显增加，GSH 水平、SOD，CAT 和 GSH-PX 活性降相比，芍药苷给药组肝组织 MDA 含量显著降低(p<0.05)；通过测结果得出，经过芍药苷治疗的小鼠肝组织的 SOD 和 CAT 活性和 GSH-PX 检测结果表明：与模型组相比，芍药苷给药组的 GSp<0.05)，GSH-PX 活性增强(p<0.01)。通过实验结果推测，芍药苷急性肝损伤小鼠的保护作用可能是通过抑制四氯化碳所致急性

【参考文献】