目的本实验通过研究参芪抑瘤方对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的调节及瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、CytC基因和蛋白表达的影响,探讨参芪抑瘤方对肝癌的抑制作用。方法购买70只昆明小鼠,体重为(20±2)g,雌雄各半,其中10只用于接种腹水,剩余60只采用腋下接种H22肝癌腹水细胞造模。造模成功后随机将小鼠分为六组,每组10只,雌雄各半,分别为模型组、环磷酰胺组、参芪抑瘤方高剂量组(中药高剂量组)、参芪抑瘤方中剂量组(中药中剂量组)、参芪抑瘤方低剂量(中药低剂量组)、参芪抑瘤方中剂量联合环磷酰胺组(联合用药组)。分组后的第2 d开始给予药物干预。参芪抑瘤方高、中、低剂量组分别给予193.75g/kg,96.86g/kg,19.38g/kg,联合用药组和环磷酰胺组每日给予环磷酰胺30mg/kg,每日灌胃一次,连续治疗15 d。15 d末小鼠禁食不禁水24 h,24 h后摘取小鼠眼球取血,随后剥离肿瘤组织和脾脏组织。观察分析结果:(1)一般生命状态;(2)脾指数、瘤重及抑瘤率;(3)肿瘤组织病理学形态变化;(4)小鼠血常规的变化;(5)小鼠外周血中CD3~+、CD4~+、CD8~+的含量;(6)瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、CytC的相关基因表达;(7)瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、CytC的相关蛋白表达。结果1、各组小鼠的生命体征及一般活动状态存在差异,各中药治疗组及联合用药组情况优于模型组和环磷酰胺组。给药期间各组小鼠体重变化结果示:与模型组相比,各治疗组小鼠体重均下降,中药高剂量组及联合用药组的体重下降最为显著,中药中、低剂量组及环磷酰胺组的体重下降其次,差异具有统计学意义(P0.05)。2、脾指数结果示:与模型组相比,各治疗组脾指数均升高,联合用药组、中药高剂量组及环磷酰胺组显著升高,中药中、低剂量组略有升高,差异具有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药高剂量组及联合用药组的脾指数均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。3、抑瘤率结果示:与环磷酰胺组相比,中药高剂量组及联合用药组的抑瘤率均升高,差异具有统计学意义(P0.05)。4、血常规结果示:与模型组相比,各治疗组的白细胞均下降,环磷酰胺组显著下降,差异有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药各治疗组及联合用药组的白细胞均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,各治疗组的红细胞均升高,差异具有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药高、中剂量组及联合用药组的红细胞均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,各治疗组的血小板均下降,差异具有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药高、中、低剂量组及联合用药组的血小板均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。5、流式细胞结果示:与模型组相比,各治疗组中CD3~+、CD4~+T细胞表达均升高,差异具有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药高、中剂量组及联合用药组中CD3~+T、CD4~+T细胞表达均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,各治疗组中CD8~+T细胞表达均下降,差异具有统计学意义(P0.05);与环磷酰胺组相比,中药高、中剂量组及联合用药组中CD8~+T细胞表达均明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。6、肿瘤组织病理学结果示:与模型组相比较,各中药治疗组、环磷酰胺组及联合用药组中的坏死细胞在细胞排列上较疏松,染色变浅,体积缩小,有不同量的坏死细胞,以中药高剂量组和联合用药组里面的坏死细胞最为显著,低剂量组和环磷酰胺组相对较少。7、基因及蛋白表达结果示:与模型组组相比,各治疗组Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均下降,中药高剂量组、环磷酰胺组及联合用药组显著下降,差异具有统计学意义(P0.05),与环磷酰胺组相比,中药高剂量组及联合用药组Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显下降,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,各治疗组瘤组织中Bax、Caspase-3、CytC mRNA及蛋白的表达均升高,中药高剂量组、环磷酰胺组及联合用药组显著升高,差异具有统计学意义(P0.05),与环磷酰胺组相比,中药高剂量组及联合用药组Bax、Caspase-3、CytC mRNA及蛋白表达均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论参芪抑瘤方可通过线粒体凋亡途径诱导荷瘤小鼠H22肝癌细胞凋亡,参芪抑瘤方联合环磷酰胺可有效提高机体的免疫力,促进癌细胞凋亡,抑制肿瘤复发转移,延缓其生长速度。
【学位单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
各组小鼠的体重变化
各组小鼠的脾指数
图 3 瘤重和抑瘤率4.5 血常规白细胞结果示：与模型组相比，各治疗组的白细胞均下降，环磷酰胺组显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）；与环磷酰胺组相比，中药各治疗组及联合用药组的白细
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