黄花白及多糖结构解析及其抗肿瘤活性研究

发布时间：2020-09-18 16:17

　　黄花白及(Bletilla ochracea Schltr)为兰科(Orchidaceae)白及属(Bletilla)多年生草本植物,以其假鳞茎入药,常被用于制作面膜和白及胶等其他用品,在市场上可作为白及的替代品。其主要有效成分为多糖,是我国传统的药用植物之一。至今,对黄花白及多糖的研究很少,其结构还不清楚,关于其药理药效的研究更是鲜有报道。基于此,本课题对黄花白及多糖的结构进行了解析,对其免疫调节抗肿瘤活性进行了初步研究,为近一步开发利用黄花白及资源提供资料。本论文主要研究内容及结果如下:1.通过热水提取法提取黄花白及多糖,利用响应面分析法(Response surface methods,RSD)优化黄花白及多糖提取工艺,结果显示最佳提取条件为:提取温度80℃、提取时间90 min、液料比30:1,并测得多糖得率率为26.45%。2.黄花白及粗多糖通过活性炭脱色,反复冻融法除蛋白后,经DEAE-52纤维素阴离子柱层析纯化,获得超纯水洗脱组分的中性多糖,进一步通过葡聚糖凝胶G-150纯化,获得均一多糖。经紫外全波长扫描检测为无蛋白无核酸的纯黄花白及多糖(B.ochracea polysaccharide,BOP)。3.运用高效凝胶色谱(HPGPC)测定BOP的分子量为4.9×105;气质联用(GC-MS)测定BOP由甘露糖(Man)和葡萄糖(Glc)组成,其比例为7.88:2.12;经甲基化及红外扫描测定糖苷键的主要连接方式为1-4糖苷键;通过一维核磁图谱结果推断BOP可能存在乙酰化。4.研究黄花白及多糖的药理活性,首先以小鼠结肠癌CT26细胞为研究对象,用不同浓度的 BOP(0、50、100、200、400、800μg/ml)分别处理 CT26 细胞 24h或48 h,通过MTT法测定各组吸光值的变化,评价BOP在体外对CT26细胞活力的影响。实验结果显示BOP在体外对CT26结肠癌细胞没有明显的杀伤和抑制效果。随后建立小鼠结肠癌CT26荷瘤小鼠模型,实验分五组,每组八只。分别为生理盐水模型组,阳性对照5-FU组,BOP高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组。各组干预两周,通过观察肿瘤变化及小鼠机体免疫相关指标的变化,检测评估BOP体内抗肿瘤效果及其机理。实验结果显示:(1)BOP能够减缓荷瘤小鼠体内实体瘤的增长速度并且呈剂量依懒性。(2)石蜡切片HE染色结果显示BOP处理后的小鼠实体瘤细胞核损伤,细胞呈现弥散状态,细胞活性低。5.为了探究BOP在体内抗肿瘤的机理,我们测定了各组荷瘤小鼠免疫细胞功能的变化,发现经BOP处理的荷瘤小鼠,其脾淋巴细胞增殖能力和腹腔巨噬细胞吞噬能力显著增强,并且BOP可促进巨噬细胞释放NO。血清检测结果显示BOP促进了小鼠的细胞免疫因子TNF-α和IL-1β释放。综上结果推断,BOP不能直接杀死或于抑制肿瘤细胞的生长,但可能会通过调节机体的免疫功能发挥抗肿瘤效果,从而抑制体内实体肿瘤的生长。
【学位单位】：陕西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

白及多糖,提取温度,黄花,多糖

２．３结果与讨论逡逑２．３．１单因素实验结果分析逡逑单因素实验结果如图２－１至２－３所示，提取温度、提取时间、液料比对多糖得逡逑率有影响，液料比影响最小。随着提取温度的升高、提取时间的延长和液料比的逡逑增加，多糖的得率均有增加，但是到达临界点的时候多糖得率反而开始下降，总逡逑体呈现出先升后降的趋势。主要原因可能是随着温度的升高、提取时间的延长，逡逑多糖能够更好的溶解出来，但是温度过高时间过长会导致多糖产生降解，浓度降逡逑低，从而影响多糖得率。液料比对多糖得率的影响可能是溶液增多更能充分的进逡逑入细胞，使细胞更容易释放多糖，虽然液料比对多糖得率的影响不是很明显，但逡逑是溶液过多会使多糖浓度降低，损失过多也更容易降解。各个单因素对多糖得率逡逑影响的临界点为提取温度８０°Ｃ、提取时间９０邋ｍｉｎ、液料比３０：１。逡逑＾３０－１逡逑２邋２８－逡逑Ｉ２６逡逑0逡逑｜２２－逡逑ｏ逡逑°－２0Ａ逦

白及多糖,提取时间,黄花,多糖

白及多糖,黄花,多糖,提取时间

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