ITS基因关联鉴定分析灵芝三萜酸高产菌株

发布时间：2020-09-18 21:26

　　灵芝是我国的传统中药,它的药用价值得到了全球的认可。随着中药分子生物学技术的发展,灵芝基因组图谱得以精细绘制,推荐灵芝成为药用模式真菌。灵芝三萜化合物有着广泛药理作用,成为了现代中药开发研究的源泉之一。由于灵芝三萜来源问题导致产量参差不齐,灵芝三萜高产菌株的筛选有待更多的研究。以传统中药理论为基础,结合最新的中药鉴定分析技术、现代化工艺生产技术,对灵芝三萜酸高产菌株进行深入研究,对菌株筛选和应用有重要意义。本文主要研究了灵芝菌株的培养、DNA条形码的提取、ITS序列扩增以及灵芝的鉴定分析。确定了供试菌株的种类为Ganoderma lucidum、Ganoderma sinense和Ganoderma applanatum。得到了赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(Ganoderma sinense)、扁芝(Ganoderma applanatum)三种菌株的主导单倍型,这三种菌株的ITS序列长度分别为542 bp,544 bp,548 bp。实验表明灵芝ITS序列有很好的鉴定作用。针对灵芝三萜酸的提取,以适合药企实际生产为基础,引入了比较具有创新性的响应曲面法,通过建立数学模型对该提取方法的过程进行优化研究。实验表明以无水乙醇作为提取溶剂,采用回流法能提高灵芝三萜酸的提取率。通过模型分析和实际操作,最终得到的工艺参数为:提取时间2 h,液料比11:1,提取次数3次。在对灵芝单倍体研究的实验中,确定了0.6M甘露醇、1.5%酶解液在37℃进行两小时反应作为分离方法。通过进行单核苷酸多态性检测,确定了灵芝的单倍体结构。该方法操作简单、稳定性强,为后续研究提供了很好的实验基础。
【学位单位】：武汉理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284
【部分图文】：

灵芝,基本骨架,种类,灵芝属

图 1-1 灵芝三萜化合物的 7 种基本骨架灵芝三萜化合物有很多种类。在陈若芸[31]等的研究中详细的介绍了 103 萜化合物的结构，对此类化合物做了系统的研究。罗俊[32]等人通过实验分到了 19 个新型的三萜类化合物，并对其做了详细的介绍。在最近的几年时，科研工作者对于研究三萜类化合物，又发现了 25 种新的该类化合物，这合物存在于灵芝属真菌的孢子或者子实体内。这些新型的化合物主要从赤

灵芝菌株,凝胶电泳,阶段研究,脂糖

分析提取结果（灵芝基因组）脂糖凝胶电泳，上述实验中所获得的 DNA 产物可见的条带，OD260/280值在1.8上下浮动，故依A 的质量，能符合下一阶段研究分析的要求。片段的扩增得的16批次的灵芝菌株ITS、5.8s rDNA区段借助ITS4 成功扩增，所收集得到的 PCR 产物片段约左侧条带为 DL2000 Marker。

灵芝菌株,系统发育进化树

灵芝菌株系统发育进化树

【参考文献】