紫斑牡丹花粉质量标准的建立及其抗氧化活性研究

发布时间：2020-09-22 18:47

　　紫斑牡丹(Paeonia rockii)为毛茛科(Ranunculaceae)芍药属(Paeonia)多年生木本植物,是我国中西部地区的特有中药材和花中珍品,其根皮作为药用丹皮被甘肃省中药材标准收载,具有清热凉血,活血化瘀的功效。为了开发和利用紫斑牡丹,本文在查阅大量文献的基础上,对牡丹的花、籽、根、花粉、叶各部位在食用和药用方面的研究进展进行了综述,并围绕紫斑牡丹花粉开展了有关质量标准及其抗氧化活性的研究,主要研究内容和结果如下:1.紫斑牡丹花粉质量标准的初步研究:按照2015版药典通则的相关方法,对紫斑牡丹花粉的性状、显微特征的进行了研究和描述;测定了总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量;采用TLC法,对紫斑牡丹花粉中的黄酮类成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、异鼠李素进行了定性鉴别;采用紫外-可见分分光光度法,对紫斑牡丹花粉中总黄酮的含量进行了测定。结果表明,紫斑牡丹花粉为黄色粉末,体轻,易飞扬,气微,味微苦;显微镜下可见花粉粒类圆形或椭圆形,表面有网状雕纹,具三拟孔沟,直径32-38μm;其总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的平均含量依次为7.45%、1.55%、28.99%;所建立的薄层鉴别方法斑点清晰、专属性好,可用于紫斑牡丹花粉的定性分析;测得紫斑牡丹花粉中总黄酮的平均含量为15.80mg·g~(-1)。2.响应面法优化紫斑牡丹花粉中总黄酮的提取工艺:采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.1%磷酸(25:13:62)为流动相等度洗脱,流速:1.0mL·min-1,检测波长:360nm,柱温35℃,建立了RP-HPLC法同时测定紫斑牡丹花粉中槲皮素、木犀草素、异鼠李素含量的方法;继而通过单因素实验遴选影响紫斑牡丹花粉总黄酮提取工艺的因素和水平,并采用Box-Behnken试验设计法,以总黄酮的含量及其3种黄酮类化合物(槲皮素、木犀草素、异鼠李素)的总含量的综合评分为评价指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,利用响应面法对紫斑牡丹花粉总黄酮提取工艺进行优化。结果表明:优选得到的最佳提取工艺为乙醇浓度为73%,料液比1:22g/mL,回流提取2次,每次100min;在此条件下,理论值与实际值接近,偏差为1.60%。优选的紫斑牡丹花粉总黄酮的提取工艺合理可行。3.紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的抗氧化能力研究:通过测定紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的3种抗氧化能力(铜离子还原能力,DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力),对紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的抗氧化活性进行评价。结果表明:铜离子还原能力(CUPRAC)法测得紫斑牡丹花粉无水乙醇提取物、75%乙醇提取物、50%乙醇提取物、25%乙醇提取物、水提取物的抗氧化活性没食子酸量依次为26.00、28.33、28.90、14.98、9.24 mg/g;紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物清除DPPH自由基和ABTS自由基能力均均低于Vc,其顺序依次为:50%乙醇提取物75%乙醇提取物无水乙醇提物25%乙醇提取物水提取物。紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物均具有较强的抗氧化能力,以50%、75%乙醇提物的抗氧化能力最强。
【学位单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.1
【部分图文】：

紫斑牡丹,花粉,拟孔,雕纹

图 1.1 紫斑牡丹花粉Fig 1.1 pollen of Paeonia rockii典》通则项下 0211 药材和饮片少量至载玻片，滴加蒸馏水，平，然后加盖玻片。放置在电并对其显微特征进行描述。显表面有网状雕纹，具三拟孔沟

紫斑牡丹,花粉,显微结构

图 1.1 紫斑牡丹花粉Fig 1.1 pollen of Paeonia rockii2.2 鉴别2.2.1 显微鉴别参照 2015 版《中国药典》通则项下 0211 药材和饮片取样法对紫斑牡丹花粉显微鉴别。取紫斑牡丹花粉少量至载玻片，滴加蒸馏水，使完全浸润花粉，用大头针将粉末与蒸馏水并推平，然后加盖玻片。放置在电子显微镜（10×40 倍和10×100 倍）下进行观察，并对其显微特征进行描述。显微观察显示，紫斑牡丹花粉粒呈类圆形或椭圆形，表面有网状雕纹，具三拟孔沟；直径 32-38μm。显微结构图：见图 1.2。

薄层色谱,紫斑牡丹

2.2.2.3 薄层色谱条件：固定相：硅胶 G254 薄层板展开剂：三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(9显色剂：1%三氯化铝乙醇溶液，6检视：紫外光灯(365 nm) 下检视点样方式：毛细管点样点样量：5 μL展距：8 cm2.2.2.4 薄层色谱薄层色谱见图 1.3，供试品色谱中，颜色的斑点。紫斑牡丹花粉样品中均检表明此方法具有特征性和专属性，可用

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