“良关系”药对丹参—降香体内物质基础研究

发布时间：2020-09-24 13:05

　　 心脑血管疾病仍然是当今危害人类健康的头号杀手,探寻和开发防治心脑血管疾病安全而有效的药物是医药工作者迫在眉睫的任务。中药复方是开发高效创新药物的源泉,阐明其药效物质基础则是其关键环节和瓶颈。药对是中药复方的核心组成部分,反映着复方核心配伍关系,从药对角度出发是研究复方物质基础的重要切入口。在前期“良关系”药对有效成分群辨识思路的指导下,本论文选择活血化瘀的经典药对“丹参-降香”为研究对象,以临床有效、质量稳定可控的香丹注射液为研究载体,从药代动力学角度对丹参-降香药对在正常及急性血瘀模型大鼠体内的药效物质基础进行系统研究,旨在为中药复方物质基础研究提供依据。全文共分3章,作者的主要贡献如下:1.建立了香丹注射液HPLC-Q-TOF/MS和GC/MS分析方法,对香丹注射液中的基础物质进行了表征与鉴定,从中鉴定出53个水溶性成分和9个挥发性成分。以上研究为丹参-降香药对的质量控制和质量标准的建立提供了基础物质的可追溯性,也为丹参-降香药对体内代谢研究奠定了同等条件下方法学基础。2.建立了大鼠血浆中丹参酚酸类的HPLC分析方法,并采用该方法和拟定的HPLC-Q-TOF/MS法考察了丹参-降香药对在正常及急性血瘀大鼠体内的代谢轮廓,共鉴定出39个药物原型成分(主要为酚酸类)及79个药物代谢产物,主要涉及甲基化、硫酸化以及葡萄糖醛酸化等代谢途径。比较了丹参-降香药对在正常及急性血瘀大鼠体内药物代谢的差异性,结果表明,病理因素会使药物成分入血增多,消除减慢,作用时间延长。3.采用拟定的HPLC-Q-TOF/MS分析方法研究了丹参-降香药对在正常及急性血瘀大鼠心、脑、肝、肾的组织分布,共鉴定出24个药物原型成分及76个药物代谢产物,主要集中分布于心、肝、肾等器官,其中吸收进入心、脑等靶器官和肝组织的物质为丹参酚酸类成分(如丹参素、迷迭香酸、丹酚酸A等),主要的代谢形式包括甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化。在急性血瘀大鼠组织中的众多代谢形式中发现并证实了异丙基化产物,不仅证实了丹参素异丙酯的存在,还首次发现了咖啡酸异丙酯。上述研究表明,异丙基化可能为“良关系”药对丹参-降香方证对应的体内重要和特征性代谢通路。4.采用主成分分析法,借助SPSS统计学软件分析了大鼠给药香丹注射液后血浆中变化明显的药物成分、内源性应答物、代谢应答物之间的相关性,结合组织分布的研究结果,初步确定丹参-降香药对体内物质基础为迷迭香酸、丹酚酸A、丹参素异丙酯、咖啡酸异丙酯、丹酚酸A的甲基化结合单葡萄糖醛酸化物、丹酚酸A的二甲基化产物以及丹酚酸A的二甲基化结合葡萄糖醛酸化产物。5.初步考察了丹参-降香药对体内物质基础之一丹参素异丙酯的体内代谢过程,确定其体内代谢产物主要为丹参素及其代谢产物。药物代谢研究的结果可为丹参素异丙酯的安全性和有效性评估提供有力支撑。同时本研究还构建了人体尿液中丹参素检测的HPLC-Q-TOF/MS分析方法学,并对缺氧炎症条件下病人尿液中的丹参素进行了结构确证(见附录)。
【学位单位】：西北大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

31图 2 丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、香草酸、咖啡酸、阿魏酸的质谱裂解模式多环酚酸类化合物多环酚酸的结构特点是结构中含有两个或两个以上的芳香环。通过与对照品保留时间、二级质谱信息的比对，初步确定化合物 28，35，36，38 分别为紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 和丹酚酸 A。化合物 35 在负离子下呈现出一个较强的分子离子峰[M H] (359.0770)，其特征性离子为 m/z 197.0441，179.0334，161.0230，表明化合物 35 的分子离子峰分 别 脱 去 了 一 分 子 咖 啡 酰 氧 基 [M H 162(caffeoyl)] ， 一 分 子 咖 啡 酸

32图 3 迷迭香酸的质谱裂解模式与化合物 35 类似，化合物 31 具有一个明显的母离子[M H] (417.0839)，其母离子首先丢失一分子 CO2产生 m/z 373.0915([M H CO2] )的碎片离子，该子离子进一步分别脱去 176(未知基团)和一分子丹参素得到子离子 m/z 197.0454[M H CO2 176 (unknown moeity)] 以及 m/z 175.0398[M H CO2 DSS] ，其二级质谱信息与先前研究[167]的丹酚酸 D 的二级质谱信息一致，因而推断化合物 31为丹酚酸 D，其裂解途径如图 4 所示。

33图 4 丹酚酸 D 的质谱裂解模式化合物 33 和 38 的分子离子峰的质荷比均为 m/z 493.11[M H] ，因而是一对同分异构体。通过与对照品色谱行为及二级质谱信息的比对，确定化合物 38 为丹酚酸 A，其代表性碎片离子 m/z 313.0694[M H CO2 CA] 是母离子通过断裂一分子咖啡酸而形成，而碎片离子 m/z 295.0602[M H DSS] 是母离子通过断裂一分子丹参素而形成，丹酚酸 A 的裂解途径如图 5 所示。化合物 33 还产生了一个典型的碎片离子 m/z 277.0503，碎片离子 m/z 277.0503 的出现表明化合物 33中存在一个五元环醚的结构，因而碎片离子 m/z 295.0601[M H 198(DSS)] 会脱

【参考文献】

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本文编号：2825758