通络糖泰方对高糖导致雪旺细胞凋亡的影响

发布时间：2020-09-24 18:19

　　目的:研究通络糖泰方对高糖原代培养雪旺细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响,探索通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的分子机制,为通络糖泰方预防和治疗DPN的机制提供一定的实验依据。方法:采用选新生的SD大鼠,取坐骨神经干,原代培养雪旺细胞后进行传代,取第三代生长状态良好的雪旺细胞作为研究对象。用50m M高糖培养72h,诱导DPN雪旺细胞模型。加入通络糖泰含药血清(4种浓度)培养,分为6个组。细胞培养72h,通过Annexin-FITC/PI双染流式细胞技术检测细胞凋亡率;通过透射电镜观察细胞超微结构变化。Western Blot法检测活化Caspase-3,AKT、p-AKT在高糖环境培养雪旺细胞24h、48h、72h三个时间点的表达。采用RT-PCR法检测凋亡调控因子Bax、Bcl-2、Bcl-x L m RNA的表达。研究通络糖泰对高糖诱导雪旺细胞凋亡的影响。并通过研究其对PI3K/AKT信号通路的影响,以抑制雪旺细胞凋亡为研究方向探讨通络糖泰治疗DPN的分子生物学机理。结果:1、Annexin-FITC/PI双染流式细胞技术检测凋亡率证实50m M高糖培养可导致雪旺细胞明显凋亡,与对照组相比,高糖培养72小时,高糖组的凋亡率明显增加(p0.01);与高糖组相比,5%、10%浓度通络糖泰含药血清组的凋亡率显著降低(p0.01)。2、透射电镜观察超微结构,培养72h,高糖组凋亡雪旺细胞增多,线粒体肿胀,线粒体嵴消失;含通络糖泰血清组雪旺细胞损伤有改善,10%浓度含药组更明显。3、Western Blot结果提示,与对照组比较,培养24h、48h、72h高糖组活化Caspase-3表达明显增加,差异具有显著性(P0.01);与高糖组比较,不同浓度含药血清组活化Caspase-3含量降低,其中培养48h、72h的5%、10%含药血清组降低具有非常显著性(P0.01)。与对照组相比,高糖组p-AKT表达明显降低;与高糖组相比,培养24h、48h、72h的2.5%、5%、10%含药血清组p-AKT蛋白表达量增高,差异具有显著性(P0.01)。4、RT-PCR法测定结果提示,与对照组相比,培养24h、48h、72h高糖组的bcl-2m RNA、Bcl-x Lm RNA表达量明显减少(P0.01),培养24h、48h、72h高糖组的Baxm RNA表达量明显增加,(P0.01);与高糖组相比,培养24h、48h、72h 5%、10%含药血清组的bcl-2m RNA、Bcl-x Lm RNA表达量明显增加(P0.01~0.05),培养48h、72h 5%、10%含药血清组的Baxm RNA表达量明显减少(P0.01)。结论:1、50m M高糖培养可导致雪旺细胞凋亡,干预72h后可引起明显的细胞凋亡,高糖培养72h雪旺细胞细胞可以作为研究DPN的雪旺细胞模型。2、通络糖泰含药血清能明显减少高糖诱导的雪旺细胞凋亡,减少凋亡程度与药物浓度有关,以5%浓度、10%浓度效果最佳。3、高糖培养雪旺细胞可引起其PI3K/AKT信号通路活化抑制,通络糖泰含药血清能有效激活高糖培养雪旺细胞PI3K/AKT信号通路。通络糖泰含药血清减少高糖诱导雪旺细胞凋亡,其作用机制可能与通络糖泰含药血清激活PI3K/AKT信号通路有关。
【学位单位】：成都中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5

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