金蝉花成分分析及多糖抗氧化活性研究

发布时间：2020-09-29 08:35

　　金蝉花(Cordyceps cicadae)为麦角菌科真菌大蝉草及其寄主山蝉若虫形成的干燥复合体,与冬虫夏草的无性型同属,在民间是一种药食两用真菌。其性寒味甘,具疏散风热、定惊镇痉等功效。蝉花主要生长在四川、江浙地区、福建、安徽及云南等省份。近年来,冬虫夏草的大规模采收导致资源枯竭,金蝉花与冬虫夏草成分相似,功效相近,有望开发成冬虫夏草的替代品。本论文系统分析了金蝉花中营养成分,建立了高效液相色谱法同时测定金蝉花中6个核苷类成分的方法,并对其主要有效成分(甘露醇、麦角甾醇和核苷类成分)进行含量测定。采用体外抗氧化活性实验对不同浓度乙醇醇沉金蝉花多糖进行筛选,得到最佳抗氧化活性多糖组分,研究了其对果蝇寿命及抗氧化活性的影响,并对其作用机制进行了初步探讨,为金蝉花进一步开发利用提供理论依据。主要研究内容如下:1.金蝉花营养成分研究。按照食品安全国家标准,对12个不同产地的金蝉花样品中主要营养成分、粗多糖以及金属成分进行含量测定。结果显示,纤维素、粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分及碳水化合物等含量分别为36.98%～42.84%、33.9%～37.62%、4.46%～8.87%、4.37%～6.06%、5.77%～9.59%和3.08%～8.40%。金蝉花粗多糖含量为2.27%～3.58%。金蝉花中金属成分Cd、Pb、Hg、As的含量均低于国标中食用菌重金属的限量标准(1.0 mg/kg、0.2 mg/kg、0.1 mg/kg和0.5mg/kg)。2.金蝉花核苷类成分的LC-MS分析及含量测定。采用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)-质谱(Mass Spectrometry,MS)联用法对金蝉花水超声提取物中核苷类成分进行定性分析,初步鉴定出7种主要核苷类成分,并对峰面积较大的6个核苷类成分(腺嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和N6-(2-羟乙基)腺苷)建立了HPLC同时测定的方法,测定了12个不同产地金蝉花核苷类成分的含量。结果显示,该方法分离度及峰形良好,精密度、准确度、稳定性和重复性等考察良好,可进行核苷类成分的检测分析;不同产地金蝉花的6个核苷类成分分别为17.6～77.34μg/g、1077.56～1538.21μg/g、50.24～481.39μg/g、293.84～705.44μg/g、408.2～784.27μg/g和534.24～921.91μg/g。3.金蝉花麦角甾醇及甘露醇含量测定。根据中国药典规定,分别采用HPLC法和紫外分光光度计法,测定12个不同产地的金蝉花菌核、子实体和整株中麦角甾醇和甘露醇的含量。结果显示,整株金蝉花麦角甾醇含量为281.88～683.1μg/g,子实体中麦角甾醇含量明显高于菌核,分别为540.57～1800.39μg/g和129.83～229.55μg/g。金蝉花中甘露醇含量为82.12～136.24 mg/g,菌核中甘露醇含量略高于子实体,其均值分别为112.53～154.29 mg/g和68.71～105.62 mg/g。4.金蝉花多糖体外抗氧化研究。通过不同浓度乙醇醇沉金蝉花水提物,得到6个金蝉花多糖组分CP 30～CP 80,并测定不同浓度醇沉金蝉花多糖的DPPH自由基和·OH自由基清除能力、总还原能力和总抗氧化能力。结果显示,金蝉花多糖组分抗氧化活性为:CP70CP60CP80CP50CP30CP40,表明金蝉花多糖组分CP70具有最佳抗氧化活性。5.金蝉花多糖CP70体内抗氧化研究。利用双氧水(H_2O_2)应激果蝇模型和正常生理衰老果蝇模型,研究高、中、低剂量(10 mg/mL、5 mg/mL和1 mg/mL)金蝉花多糖组分CP70对果蝇寿命的影响,并测定了中剂量组(5 mg/mL)金蝉花多糖组分CP70对果蝇体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化氢酶(CTA)活力的影响,同时利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定4种衰老相关基因(CAT、过氧化物歧化酶SOD1、MTH和SIRT2)mRNA表达水平。结果显示,金蝉花多糖CP70组分对两种模型下果蝇的平均寿命和最高寿命均有延长,且中等剂量组(5 mg/mL)效果最为显著;5 mg/mL金蝉花多糖组分CP70显著升高了CAT酶(P0.01)和GSH-Px酶活力(P0.001),降低了MDA的含量(P0.001);另外,金蝉花多糖组分CP70显著上调了果蝇体内CAT、SOD1和MTH mRNA水平的表达(P0.05),而对SIRT2mRNA水平的表达无显著差异,推测金蝉花多糖组分CP70能显著延长果蝇寿命可能与上调抗氧化相关基因CAT、SOD1和MTH的表达水平有关。
【学位单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284
【部分图文】：

蝉花,藏医,方剂,公元

图 1.1 野生金蝉花Fig.1.1 The picture of Cordyceps cicadae籍[17]是唐代（公元 8 世纪中期）藏医病的方剂。在 1765 年，清代医药学家

蝉花,高效液,柱前衍生化,缺血再灌注损伤

具有抗炎、抗肿瘤、肾脏保护、镇静A 对小菜蛾具有一定的杀虫活性,可导致和致死等现象。朱碧纯[58]等发现从金惊厥模型有抑制作用，并推测其机制可能 HEA 对小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型NF-αm RNA 的水平。一种真菌和细菌的代谢产物[60]，具有免余佳文[62,63]等建立了柱前衍生化高效液而，野生蝉花中 ISP-1 含量较少[63]，徐离得到 ISP-1，且优化了多球壳菌素的分小鼠肾小球系膜细胞肥大及细胞外基质活的大鼠肾小球系膜细胞增生有抑制作

曲线,葡萄糖,蝉花,多糖含量

图 2.1 葡萄糖的标准曲线Fig 2.1 The Glucose standard curve表 2.3 金蝉花多糖成分含量（%）（n=3）Tab 2.3 The polysaccharide contents of Cordyceps Cicadae样品多糖含量% 相对标准偏差S01 3.33 0.06S02 3.03 0.06S03 3.58 0.07S04 3.03 0.10S05 2.63 0.04S06 2.66 0.07S07 2.79 0.10

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