从《内经》“脾脑相关”思想探讨健脾益气方抗神经细胞凋亡的作用及机理

发布时间：2020-09-29 18:14

　　 本文主要分为两部分,第一部分为理论探析,具体研究内容如下:目的:研究脾和脑之间的联系,发现其相关性,探讨脑病从脾论治的理论性、科学性和临床应用的合理性,为健脾益气法治疗脑缺血再灌注的临床应用提供理论依据,也为脑血管病的临床防治提供新思路和新方法。方法:通过研究《内经》中对脾与脑的认识以及后世医家对脾、脑的研究,挖掘脾和脑之间的联系,并在此基础上提出“脾脑相关”思想,进一步提出“脑病从脾论治”这一新理念。结果:脾与脑生理上密切相关,脾与脑病理上也密切相关。结论:从《内经》以及后世医家对“脾脑相关”“脑病从脾论治”的认识,可以推断出健脾益气法治疗中风具有有力的辨证性、独特性与可行性。从脾论治脑病也为现代诸多脑病的治疗展现出了新的思路与方法。对于有效改善脑病的治愈率和提高患者的生存质量有着较为深远的影响。第二部分为实验研究,具体研究内容如下:目的:观察健脾益气方大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤后脑组织神经细胞外基质Fibulin-5、P-Akt、P-BAD及凋亡因子Bcl-2、caspase-3表达情况的影响,探讨健脾益气法组方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的干预机理。方法:将120只雄性SD大鼠随机分为Sham组(假手术组)24只、MCAO组(模型制备组)96只。采用线栓法制备MCAO模型,造模成功后按大鼠神经功能缺损评分进行随机分层,根据分层结果随机分为MCAO组、阳性药物组(依达拉奉组)、健脾益气方高剂量组、低剂量组4组。分3天、7天后分批处死大鼠,处死前进行神经功能缺损评分,运用HE染色法进行病理组织学观察,免疫组化法检测脑组织神经细胞外基质Fibulin-5、P-Akt、P-BAD及凋亡因子Bcl-2、caspase-3的表达,采用Tunel染色法检测凋亡的神经细胞。结果:3天组:与Sham组相比,MCAO组大鼠神经功能评分明显增加(P0.01),神经细胞凋亡指数(AI)明显升高,Fibulin-5蛋白表达减少,caspase-3蛋白表达显著增加,P-Akt、P-BAD、Bcl-2蛋白表达明显减少,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与MCAO组相比,阳性药物组和健脾益气方各剂量组大鼠神经功能评分无明显降低(P0.05),神经细胞凋亡指数(AI)无降低。阳性药物组和健脾益气方各剂量组脑组织Fibulin-5,P-Akt,Bcl-2蛋白表达无明显增高,caspase-3蛋白表达无明显减少,差异不具有统计学意义(P0.05)。同MCAO组比较,依达拉奉和健脾益气方各剂量组脑组织P-BAD蛋白含量明显增高,差异具有统计学意义(P0.05)。7天组:与Sham组相比,MCAO组大鼠神经功能评分明显增加(P0.01),神经细胞凋亡指数(AI)明显升高,Fibulin-5表达减少,caspase-3表达显著增加,P-Akt、P-BAD、Bcl-2表达明显减少,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与MCAO组相比,阳性药物组和健脾益气方各剂量组大鼠神经功能评分降低(P0.05),神经细胞凋亡指数(AI)明显降低。阳性药物组和健脾益气方各剂量组脑组织Fibulin-5蛋白表达增高,caspase-3蛋白表达显著减少,P-Akt、P-BAD、Bcl-2蛋白表达明显增高,差异均有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:健脾益气方可以改善(I/R)大鼠神经功能缺损情况,促进神经功能的恢复,减少神经细胞损伤。健脾益气方上调细胞外基质Fibulin-5的表达,减少caspase-3蛋白表达,增加P-Akt、P-BAD、Bcl-2蛋白表达,降低凋亡指数AI,提示健脾益气方可能通过稳定神经元细胞外基质,从而抑制细胞发生凋亡,起到保护脑缺血损伤的作用。健脾益气方对脑缺血的保护和治疗作用从实验结果来看与给药时间之间有明显的时效关系,3天组多无统计学意义,而7天组出现明显改善。因而健脾益气方用于治疗时用药时间不宜过短,建议不少于7天为宜。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

注 ：1Sham 组 ， 2Mcao 组 ， 3 低 剂 量 组， 4 高 剂 量 组 ， 5 阳 性 药 物 组图 1 病 理 组 织 形 态 观 察 （ HE 染 色 法 × 400）七天组 ：光学显微镜下观察，可见 Sham 组神经细胞形态 、排列度、胞核位置正常，核仁深染，呈现蓝紫色，胞浆呈粉红色、核膜清见，均未见炎性细胞浸润现象。Mcao 组脑组织缺血皮质区大量神经细

注 ：1Sham 组 ， 2Mcao 组 ， 3 低 剂 量 组， 4 高 剂 量 组 ， 5 阳 性 药 物 组图 2 病 理 组 织 形 态 观 察 （ HE 染 色 法 × 400）5.3 健脾益气法组方对脑缺血再灌注大鼠 Fibulin-5，P-AP-BAD，Bcl-2 和 caspase-3 蛋白表达水平的影响

注 ：1Sham 组 ， 2Mcao 组 ， 3 低 剂 量 组， 4 高 剂 量 组 ， 5 阳 性 药 物 组图 2 三 天 组 Fibulin-5 蛋 白 的 表 达 （ 免 疫 组 化 ×400）

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本文编号：2830082