马齿苋多糖的分离纯化及结构分析

发布时间：2020-10-01 19:50

　　 马齿苋(Portulaca oleracea L)又名马苋菜,是药食两用植物,全草可供药用,野生生长,遍布全国各地。马齿苋含有多种有效成分,如多糖、酮类、氨基酸等。多糖作为其主要成分之一具有抗炎、抗肿瘤、降血糖等多种活性。目前已有的研究表明,大多集中于水溶液提取马齿苋多糖的探讨,而对其碱溶液提取的马齿苋多糖的尚未见报道。本论文在分别对水溶液和碱溶液提取的马齿苋多糖进行分离纯化的基础上,建立了马齿苋多糖分离纯化的方法;并对其中的部分多糖结构进行了初步的分析,以期为进一步研究该多糖的结构与功能关系奠定基础。本论文以干燥的马齿苋为实验原料,首先采用热水煮提法得到水提马齿苋多糖POPW,得率为5.0%。经测定POPW的多糖含量为40.6%,蛋白质含量为5.5%。接下来以水提马齿苋的残渣为实验原料,采用碱溶液提取法得到碱提马齿苋多糖POPA,得率是20.0%。POPA的多糖含量为48.7%,蛋白含量为21.0%。由此可见,马齿苋中POPA的含量高于POPW。POPW和POPA经过反复冻融、分级醇沉后,采用DEAE-Cellulose离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶层析进一步分离纯化得到不同多糖组分。分离纯化结果表明,POPW分离出2种中性糖POPW50-N、POPW75-N;3种酸性糖POPW30-A、POPW50-A、POPW75-A,其中组分POPW30-A-b(30%乙醇沉淀后的酸性杂多糖经凝胶层析后获得)是POPW的主要成分,得率是18.6%,分子量为41.2 KDa,其糖醛酸含量大约90%。POPA经上述分离纯化后,得到不同分子量大小的2种中性糖POPA-N-a(52.6 KDa)、POPA-N-b(24.8 KDa);主要的酸性糖有5种,即POPA-A-1a(185.2 KDa)、POPA-A-1b(68.7 KDa);POPA-A-2a(134.3 KDa)、POPA-A-2b(49.6 KDa);POPA-A-3b(155.5 KDa),其中POPA-A-1a、POPA-A-1b为主要组分。已有的研究结果表明,POPW30-A-b具有良好的佐剂效应,因此,本论文对POPW30-A-b多糖进行了结构分析;同时也初步解析了与POPW30-A-b分子量相似的中性多糖POPA-N-a的结构,为进一步探讨POPW30-A-b和POPA-N-a的构效关系奠定基础。采用高效液相色谱、甲基化分析、红外光谱以及核磁共振分析对POPW30-A-b和POPA-N-a进行了初步的结构分析。结果表明POPW30-A-b是α-1,4-GalAp聚糖,为未酯化的果胶多糖HG结构域;POPA-N-a是以1,4-Gal为主链的阿拉伯半乳聚糖,可能的侧链结构在Gal的O-6上有分支,且含有Gal和Ara末端。
【学位单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284
【部分图文】：

图 1-1 高碘酸氧化原理图[57]2. 酶解法酶解法是研究植物多糖结构的一种常用手段，具有专一性、高效性的优点，可特异性水解特定的糖苷键，且可得到寡糖或不同分子量大小的多糖片段，常用于寡糖的精细结构分析。主要的酶有淀粉酶、果胶酶、与纤维素酶，果胶酶中包括外切多聚半乳糖醛酸酶和内切多聚半乳糖醛酸酶、PME 等[58]，可特异性水解半乳糖醛酸位点。滕贺[59]利用半乳糖醛酸内切酶（Endo-PG）水解人参果胶多糖，将 HG 结构域酶解去除后成功制得 RG-I 结构（I 型聚鼠李半乳糖醛酸）。3.仪器分析法（1）紫外光谱（UV）和红外光谱（FI-IR）紫外光谱一般用于多糖的纯度鉴定，可鉴定多糖中是否含有蛋白质和核酸，紫外吸收分别在 280nm 和 260nm 处。红外光谱是利用连续波长的红外光源照射样品，样品中的分子会吸收某些波长的光，没有被吸收的光会到达检测器上而得到单光束光谱。在被吸收的光的波长或波束位置会出现吸收峰。与分子振动直接相关，包括弯曲振动、对称伸缩振动、反对称伸缩振动，根据不同的分子振动频

提取的马齿苋多糖 POPW 和碱溶液提取的多糖样品 PO OD 值的平均值带入葡萄糖标准曲线方程中，经计算得出5%，POPA 多糖含量是 48.7%。PW 和 POPA 蛋白质含量的测定白质浓度 μg/μL 作为标准曲线的横坐标，OD 值（595 n，绘制蛋白质标准曲线如图 2-4 所示：其回归方程为 yR2 = 0.9981。图 2-3 葡萄糖标准曲线

溶液提取的马齿苋多糖 POPW 和碱溶液提取的多糖样品 P的 OD 值的平均值带入葡萄糖标准曲线方程中，经计算得出 40.5%，POPA 多糖含量是 48.7%。 POPW 和 POPA 蛋白质含量的测定含蛋白质浓度 μg/μL 作为标准曲线的横坐标，OD 值（595 n坐标，绘制蛋白质标准曲线如图 2-4 所示：其回归方程为 26，R2 = 0.9981。图 2-3 葡萄糖标准曲线

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本文编号：2831929