大黄素衍生物HXX-37抗肿瘤作用及机制研究

发布时间：2020-10-09 11:17

　　 目的:观察大黄素衍生物HXX-37对肿瘤细胞的体外增殖、凋亡相关蛋白和细胞ROS含量及相关蛋白水平的影响。探讨活性氧(ROS)是否参与HXX-37诱导细胞凋亡的过程。方法:1采用磺酰罗丹明B(Sμlforhodamine B,SRB)比色法,检测大黄素原药和大黄素衍生物(HXX-37)对不同贴壁肿瘤细胞的抗肿瘤活性以及对正常细胞的抑制作用。2采用流式细胞术检测不同浓度的大黄素衍生物HXX-37诱导肝癌细胞(Hep G2)、急性T细胞白血病细胞株(jurkat)的凋亡情况。3用ROS试剂盒检测不同浓度的大黄素衍生物HXX-37及同一浓度不同时间作用后的肿瘤细胞内ROS水平。4提取Hep G2细胞的蛋白质,用Western blot印迹法检测大黄素衍生物HXX-37对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Caspase3、Caspase 9蛋白表达水平的影响。结果:1体外增殖抑制实验结果表明,大黄素衍生物HXX-37对肿瘤细胞系(Hep G2、A549)增殖抑制作用最显著,大黄素对上述细胞也有一定的增殖抑制作用,作用于Hep G2细胞72h后的IC50为26.38±1.1921μmol/L;大黄素衍生物HXX-37对Hep G2和A549的增殖抑制作用明显,且呈浓度依赖性和时间依赖性,作用72h的IC50分别为0.2864±0.0004μmol/L、0.2335±0.001μmol/L。2与作用于Hep G2的IC50相比,大黄素作用于293细胞比作用于Hep G2细胞的IC50小,而HXX-37作用于293细胞的IC50为作用于Hep G2细胞IC50的两倍。3 ROS检测实验显示大黄素衍生物HXX-37作用后Hep G2细胞和jurkat细胞内ROS含量显著增多,HXX-37终浓度为0.2μmol/L作用于上述细胞1h、3h、6h、12h后,ROS的含量随着作用时间的延长而增加;HXX-37终浓度分别为0.8、0.4、0.2、0.1μmol/L,作用于上述肿瘤细胞3小时后,随着浓度的增加,活性氧浓度显著增加,在一定的浓度范围内呈浓度和时间依赖性。4流式细胞术显示,大黄素衍生物HXX-37可诱导Hep G2和jurkat凋亡,0.4μmol/L HXX-37诱导Hep G2的凋亡率为28.61%,0.4μmol/LHXX-37诱导jurkat细胞的凋亡率为50.5%。呈现出浓度依赖性。5 Western blot法检测结果显示,不同浓度的大黄素衍生物HXX-37作用于Hep G2细胞,细胞PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,Bax、Caspase 3、Caspase 9蛋白表达逐渐增强,呈明显的浓度依赖性。结论:1大黄素季擕盐衍生物HXX-37抑制肿瘤增殖作用比大黄素更显著。2 HXX-37诱导肿瘤细胞凋亡呈现时间依赖性和浓度依赖性。3大黄素季擕盐衍生物HXX-37可明显增加细胞内ROS水平,呈时间依赖性和浓度依赖性,ROS在大黄素衍生物诱导的细胞凋亡中起到重要作用。4大黄素衍生物HXX-37诱导Hep G2细胞凋亡的机制可能与下调PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白水平的表达,进而激活caspase9,并最终激活下游的caspase3有关。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：

pase -3 的活化也代表细胞凋亡是不可逆转的[黄素治疗结肠癌，会导致细胞的线粒体功能 增 加[8]，表明了 ROS的积累对于大黄素诱导瘤细胞凋亡，主要通过死亡受体介导的凋亡途径的多药耐药，抑制肿瘤血管生成及肿瘤的侵袭，抑菌、抗炎及免疫调节作用，对肝细胞的用[11]，对心脑血管病的作用，抑制肿瘤生长, 改疗作用[12]。改造势在必行

素诱导肿瘤细胞凋亡，主要通过死亡受体介导的凋亡途径和 线粒体凋亡制肿瘤细胞的多药耐药，抑制肿瘤血管生成及肿瘤的侵袭、转移[10]，增加疗的敏感度，抑菌、抗炎及免疫调节作用，对肝细胞的保护及抗纤维化肠道的作用[11]，对心脑血管病的作用，抑制肿瘤生长, 改善肿瘤的耐药性胰腺炎的治疗作用[12]。大黄素的改造势在必行图 1 大黄素结构式

图 3 大黄素作用于 HepG2 细胞 72 h 的量效曲线图 HepG2 癌细胞 48 h、72 h、96 h 的 IC50分别为0.30.24±0.09 μmol/L。差异无统计学差异（P＞0.0作用时间延长，IC50减小，抑制作用增强。XX-37 对 HepG2 细胞的增殖抑制作用（46h、72h、96onInhibitory rate (%）HXX-37(48h） HXX-37(72h） HXX-3779.23±0.61 89.12±0.36 98.28± 70.72±0.79 79.59±0.61 90.60± 33.44±1.03 38.00±0.55 42.75±5 9.04±0.25 12.75±0.61 13.75±5 4.07±0.37 6.16±0.12 7.8±25 2.12±0.28 3.47±0.49 7.2±25 1.03±0.67 1.14±0.36 3.7±

【参考文献】

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本文编号：2833620