桑根皮素对MDA-MB-453、HCT116和H1299癌细胞的抑制作用及其机理探讨

发布时间：2020-10-09 18:32

　　 本实验以桑根皮素为研究对象,通过对20种癌细胞进行药物筛选实验,发现桑根皮素对大多数癌细胞有生长抑制作用,因此作者深入研究了桑根皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,抗侵袭、浸润作用和诱导细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用机制,为蚕桑业废物资源循环利用、蚕桑业可持续发展以及中药抗肿瘤作用奠定了基础,为桑枝皮中生物活性物质——一桑根皮素的药用研发以及临床应用提供了有用的理论和实验依据。本文的研究主要涉及以下内容:(1)本文以桑根皮素为药物,对20种癌细胞进行了药物筛选实验。实验分组为对照组(0.5%DMSO)和不同浓度桑根皮素处理组(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)。实验结果显示,桑根皮素对20种癌细胞均有抑制作用,其中高浓度处理组(20μg/ml)的肿瘤抑制率均可达到84%以上,均呈现浓度依赖。IC50结果显示,20种癌细胞的IC50平均值为6.211μg/ml,其中有80%的细胞IC50值小于等于6.45μg/ml。由此可以得出桑根皮素对大多数癌细胞有很好的抑制作用。(2)本文针对乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116进行实验,用不同浓度桑根皮素溶液(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)处理以上三种细胞,处理时间分别为24h,48h,72h。实验结果说明,桑根皮素对以上三种细胞均有生长抑制作用,并呈现时间—浓度依赖性,其中20μg/ml桑根皮素溶液处理以上细胞48h后,肿瘤抑制率分别高达94.02%、97.9%和 91.9%。(3)不同浓度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)处理乳腺癌细胞MDA-MB-453和结肠癌细胞HCT116,Western blotting结果显示,桑根皮素可上调上皮标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin),下调间质细胞标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin),并且均呈现剂量效应。说明桑根皮素可逆转EMT,抑制这三种肿瘤的迁移、侵袭和浸润。(4)不同浓度桑根皮素溶液(5μg/ml、1Oμg/ml、20μg/ml)作用于乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116,48h后,实验结果显示细胞均发生凋亡,并呈现剂量依赖,其中MDA-MB-453细胞在高浓度(20μg/ml)桑根皮素溶液处理后,凋亡率高达77.73%,差异极显著(P0.01)。Western blotting结果显示,桑根皮素可上调Bax和cleaved caspase-3,下调Bcl-2和caspase-3,说明桑根皮素可诱导乳腺癌、人肺癌和结肠癌细胞发生凋亡。(5)不同浓度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)作用于乳腺癌细胞MDA-MB-453和结肠癌细胞HCT116,实验结果发现,桑根皮素浓度为10μμg/ml时,MDA-MB-453细胞被阻滞于G2期,HCT116细胞被阻滞于S期。因此说明桑根皮素可扰乱乳腺癌和结肠癌细胞的周期。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：

．Ｆｉｇ邋３．邋ＩＣ５０邋ｖａｌｕｅ邋ｏｆ邋Ｍｏｒｕｓｉｎ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｏｎ邋２０邋ｃａｎｃｅｒ邋ｃｅｌｌｓ逡逑桑根皮素处理２０种癌细胞４８ｈ后，由图２ＭＴＴ、ＣＣＫ８结果可以看出，素对所测２０种癌细胞均有明显的生长抑制作用，高浓度组的肿瘤抑制率８４％以上，并呈现浓度依赖性。ＩＣ５Ｃ结果显示，２０种癌细胞的ＩＣ５0平１／ｍｌ0逡逑

桑根皮素对ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、ＨＣＴ１１６和Ｈ１２９９癌细胞的抑制瘤抑制率已达到８３．５７％，４８小时时肿瘤抑制率达到９４．０２°／。；在桑根皮素浓度为２０ｐｇ／ｍｌ，处理时间为１２ｈ时，细胞抑制率抑制生长作用。逡逑桑根皮素对癌细胞凋亡的影响逡逑？逦．ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ邋ＰＲＯＦＩＬＥ逦ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ邋ＰＲＯＦＩＬＥ逡逑＊＊＇

ＭＤＡ－ＭＢ－４５３细胞经ＡｎｎｅｘｉｎＶ／７－ＡＡＤ染色后流式细抱检测细胞凋亡；（Ｂ）－４５３细胞４８ｈ后的凋亡率。（＊表示与正常对照组相比０．０１＜ｐ＜０．０５，差异显对照组相比ｐ＜０．０１，差异极显著）逡逑ＭＤＡ－ＭＢ－４５３ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ／７－ＡＡＤ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ａｎｄ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｗａｓ；邋（Ｂ）邋Ｔｈｅ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＭＤＡ－ＭＢ－４５３邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（＊０．０１邋＜邋ｐ邋＜邋０．０５．邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ；邋＊＊邋ｐ邋＜邋０．０１．邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎ３７逡逑

【参考文献】

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本文编号：2834041