胡椒碱对IR细胞模型糖代谢AMPK信号通路下游相关靶点干预研究

发布时间：2020-10-10 04:18

　　 目的:本研究通过建立Hep G2人肝癌细胞株和C2C12小鼠成肌细胞株IR模型,观察PIP对AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)信号通路激活后肝细胞中糖异生关键因子TORC2(环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)辅激活物2)、肌细胞中GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)以及两种细胞中PGC-1α(过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子1α)的干预作用。探索PIP改善糖代谢紊乱作用及可能的分子药理学机制。方法:1.观察PIP对Hep G2人肝癌细胞IR模型糖代谢紊乱相关因子的m RNA和蛋白的干预作用:用终浓度为1μM的DEX诱导HepG2人肝癌细胞建立IR模型,将其分为:IR模型组、阳性药组(ROG组和Met组)、PIP组。给药干预后分别检测相应时间段各组的葡萄糖消耗量并收集细胞,检测目的因子:AMPKα、TORC2、PGC-1α蛋白及m RNA的表达。2.观察PIP对C2C12小鼠成肌细胞IR模型糖代谢紊乱相关因子的m RNA和蛋白干预作用:C2C12小鼠成肌细胞在六孔板中长至70%-80%时,换用含2%马血清的培养液代替完全培养基诱导7-10天,成肌细胞即分化为肌小管细胞。采用终浓度为0.5m M的PA诱导分化好的肌小管细胞建立IR模型,将其分为:IR模型组、阳性药组(ROG组和Met组)、PIP组。给药干预后分别检测相应时间段各组的葡萄糖消耗量并收集细胞,检测目的因子:AMPKα、PGC-1α、GLUT4蛋白及m RNA表达。结果:1.1μM的DEX作用于Hep G2人肝癌细胞48h后成功建立IR模型,用阳性药(ROG、Met)和PIP干预后,IR模型细胞葡萄糖消耗量显著增加。2.0.5m M的PA作用于C2C12肌小管细胞16h后成功建立IR模型,用阳性药(ROG、Met)和PIP干预后,IR模型细胞葡萄糖消耗量显著增加。3.五个浓度PIP分别干预IR模型HepG2细胞后,显示上调AMPKα的m RNA和蛋白表达,抑制TORC2、PGC-1α的m RNA和蛋白表达。4.对比五个浓度PIP对HepG2细胞作用后五个时间点的葡萄糖消耗量,及各对应因子的m RNA表达和蛋白表达,显示的时效和量效结果是10μM,24h时PIP各项指标作用最显著。5.五个浓度PIP分别干预IR模型C2C12细胞后,显示上调AMPKα、PGC-1α、GLUT4 m RNA表达;其蛋白表达也相应增加。6.对比五个浓度PIP对C2C12细胞作用后五个时间点的葡萄糖消耗量,及各对应因子的m RNA表达和蛋白表达,显示的时效和量效结果是36h 10μM对GLUT4蛋白表达促进明显,36h 5μM对PGC-1α蛋白表达促进明显。结论:1.PIP通过上调细胞p-AMPKα的表达激活AMPK信号通路,增加Hep G2细胞、C2C12细胞IR模型上清中葡萄糖的消耗量而改善糖代谢紊乱。2.激活AMPK信号通路后,可抑制HepG2细胞中TORC2、PGC-1α的表达,减少糖异生。上调C2C12细胞中PGC-1α、GLUT4的表达,增加糖转运。这些因子都是与IR的发生发展密切相关的,这可能是PIP改善IR的部分作用机理。
【学位单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号与说明
引言
一、PIP对HepG2细胞IR模型糖代谢AMPK信号通路下游靶点的干预研究
    第一章 HepG2细胞培养及IR模型的建立
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第二章 PIP对HepG2细胞IR模型糖代谢紊乱的改善作用
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第三章 PIP对HepG2细胞IR模型AMPKα、TORC2、PGC-1α mRNA的影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第四章 PIP对HepG2细胞IR模型AMPKα、p-AMPK、TORC2、PGC-1α蛋白表达的影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
二、PIP对C2C12细胞IR模型糖代谢AMPK信号通路下游靶点的干预研究
    第一章 C2C12细胞培养及IR模型的建立
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第二章 PIP对C2C12细胞IR模型糖代谢紊乱的改善作用
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第三章 PIP对C2C12细胞IR模型PGC-1α、GLUT4 mRNA的影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.结果及结论
        4.统计学方法
        5.本章小结
    第四章 PIP对C2C12细胞IR模型AMPKα、p-AMPK、PGC-1α、GLUT4蛋白表达的影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.统计学方法
        5.本章小结
讨论
结论与展望
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章
致谢

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本文编号：2834713