β-细辛醚对Glu损伤PC12细胞的保护及其对NMDAR亚型表达影响

发布时间：2020-10-10 19:48

　　 目的:探讨β-细辛醚对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用以及NMDA受体亚型和突触素表达的影响。方法:PC12细胞分为正常组,模型组和治疗组组,正常组用无血清DMEM培养基培养,模型组用含50mM谷氨酸的无血清DMEM培养,治疗组用10 μM的β-细辛醚与含50mM谷氨酸的无血清DMEM培养共同培养,2 h后观察电子显微镜下细胞形态,用cck-8检测其活力;采用流式细胞术检测细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡等的变化。免疫荧光技术检测突触素(SYP)在各组细胞中的表达,并用PCR扩增技术对其细胞内 NMDA 受体亚型的基因(NR1,NR2A,NR2B,NR2C,NR2D,NR3A,NR3B)mRNA 的表达进行分析。结果:经谷氨酸损伤的PC12细胞与正常培养的细胞相比,活力明显低于正长培养组细胞(P0.01)。与治疗组比,治疗组明显活力高于模型组(P0.01),与正常组比,正常组活力高于治疗组。通过流式分析,模型组的细胞内Ca2+浓度与正常组细胞内Ca2+浓度相比,明显高于正常组(P0.01);与治疗组相比,细胞内Ca2+浓度略高于治疗组(P0.05);与正常组比,治疗组Ca2+浓度无统计学意义(P0.05)。模型组线粒体膜电位与正常组相比,明显低于正常组(P0.01);与治疗组比,略低与治疗组(P0.05);与正常组比,正常组线粒体膜电位高于治疗组(P0.01)。模型组的细胞凋亡率与正常组比,明显高于正常组(P0.01);与治疗组相比,略高于治疗组(P0.05);与正常组比,正常组凋亡率低于治疗组(P0.01)。通过免疫荧光技术,与正常组比,模型组细胞中SYP荧光强度明显弱于正常组(P0.01),与治疗组比,治疗组SYP荧光强度强于模型组(P0.05),正常组SYP阳性细胞数相比与模型组增多(P0.01),SYP阳性细胞数与模型组比较多(P0.05);与正常组比,治疗组SYP阳性细胞数无统计学差异(P0.05)。与正常组比,模型组细胞中NMDA受体亚型NR1 mRNA的表达显著低于正常组(P0.01),而模型组NR2A的表达也显著低于正常组(P0.01);与模型组比,治疗组细胞中NR1mRNA表达量显著高于模型组(P0.01),治疗组中NR2A的表达也高与模型组(P0.05)。与正常组比,模型组细胞中NR2BmRNA的表达低于正常组(P0.05),模型组中NR2CmRNA的表达显著低于正常组(P0.01);与模型组比,治疗组细胞中NR2BmRNA表达量高于模型组(P0.05),治疗组中NR2C的表达高与模型组(P0.05)与正常组比,模型组细胞中NR2DmRNA的表达没有统计学意义(P0.05),而模型组NR3A mmRNA的表达显著低于正常组(P0.01);与模型组比,治疗组细胞中NR2DmRNA表达没有统计学意义(P0.05),治疗组中NR3A的表达高与模型组(P0.05)。与正常组比,治疗组中NR1、NR2B、NR2C、NR2D、NR3AmRNA的表达无统计学意义(P0.05);而NR2AmRNA的表达则低于正常组(P0.05)。但是我们没有检测到NR3B亚型基因在各组细胞中的的表达。结论:β-细辛醚能够对谷氨酸损伤的PC12细胞有一定的保护作用,能够增强突触素(SYP)在细胞内的表达,其机制可能是通过调节NMDA受体亚型基因的表达来起保护作用,但是其如何调节NMDA受体亚型基因,有待进一步研究。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文献研究
    1.1 谷氨酸及其与NMDA受体的研究现状
        1.1.1 谷氨酸及其理化性质
        1.1.2 谷氨酸在医药领域的用途及研究
        1.1.3 谷氨酸在中枢神经系统中的研究
        1.1.4 NMDA受体及其生理结构
        1.1.5 NMDA受体生理功能的研究
        1.1.6 NMDA受体与神经系统疾病的研究现状
    1.2 突触素（SYP）的研究近况
        1.2.1 突触素及其形态结构及其种类
        1.2.2 突触素生理功能的研究
        1.2.3 突触素与神经系统疾病的研究
    1.3 PC12细胞及其谷氨酸损伤模型研究
        1.3.1 PC12细胞来源及其特性
        1.3.2 PC12细胞的分化及其研究
    1.4 中药石菖蒲有效成分及其对中枢神经系统的影响
        1.4.1 中药石菖蒲及其有效成分
        1.4.2 石菖蒲对中枢神经对中枢神经系统的作用
        1.4.3 石菖蒲有效成分β -细辛醚及其药理作用
    1.5 谷氨酸损伤PC12细胞模型以及B-细辛醚的对其保护作用的研究
        1.5.1 谷氨酸损伤PC12细胞模型的研究
        1.5.2 β-细辛醚对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用
第二章 实验研究
    2.1 谷氨酸损伤PC12细胞模型建立及B-细辛醚保护作用浓度筛选
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 数据统计
        2.1.4 结果
2+浓度、线粒体膜电位、细胞凋亡'>    2.2 流式细胞术检测细胞内CA²⁺浓度、线粒体膜电位、细胞凋亡
        2.2.1 实验材料及仪器
        2.2.2 实验方法
        2.2.3 数据统计
        2.2.4 结果
        2.2.5 讨论
    2.3 免疫组化检测突触素（SYP）蛋白表达
        2.3.1 实验材料及仪器
        2.3.2 实验方法
        2.3.3 数据统计
        2.3.4 结果
        2.3.5 讨论
    2.4 PCR扩增检测NMDAR亚型基因在各组中的表达
        2.4.1 实验材料及试剂
        2.4.2 实验步骤
        2.4.3 数据统计
        2.4.4 结果
        2.4.5 讨论
结语
参考文献
附录
统计学审核证明
在校期间发表论文情况
致谢

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本文编号：2835509