AQP7介导的人参皂苷Rb1改善肥胖的作用及其机制研究

发布时间：2020-10-11 11:27

　　 目的(1)观察人参皂苷Rb1对单纯性肥胖的作用;(2)探索人参皂苷Rb1在分化成熟3T3-L1脂肪细胞中对脂质转运的作用(3)明确人参皂苷Rb1是否通过PPARγ/AQP7途径发挥改善肥胖的作用。方法体内实验,采用4-5周龄的C57BL/6雄性小鼠给予高脂饮食(脂肪含量60%)喂养,构建单纯性肥胖模型构,进行相应药物(人参皂苷Rb1、PPARγ抑制剂GW9662、DMSO)处理,检测小鼠体质量、体脂量、脂肪细胞大小,糖耐量试验,血清学检测血脂、血糖、肝功能变化。免疫组化分析脂肪组织内AQP7、PPARγ的定位表达,Western-blot测定脂肪组织中AQP7、PPARγ、p-PPARγ的表达量。体外实验,采用3T3-L1细胞诱导成为成熟的脂肪细胞,不同浓度的Rb1处理筛选出最适浓度,其后将细胞分为空白对照组、Rb1组、GW9662+Rb1组、DMSO+Rb1组。油红O染色观察细胞内脂滴大小及其含量,ELISA试剂盒检测细胞培养基中游离三酯甘油、瘦素、脂联素表达量,Western-blot测定脂肪组织中AQP7、PPARγ、p-PPARγ的表达量。结果1.与普食对照组小鼠体质量比较,高脂饮食小鼠体质量约为普食组小鼠体质量的1-1.5倍,单纯性肥胖小鼠模型造模成功。2.与对照组相比较,人参皂苷Rb1处理组(HFD+Rb1)的肥胖小鼠体质量和体脂率降低,差异有统计学意义(P0.05),比较HFD+Rb1组与HFD+GW9662+Rb1组肥胖小鼠体质量以及体脂率,给予肥胖小鼠PPARγ特异性抑制剂GW9662处理后可部分逆转Rb1减轻体质量以及体脂率的作用。3.IPGTT法检测肥胖小鼠糖耐量,与对照组比较,HFD+Rb1组肥胖小鼠血糖调节能力较强,差异有统计学意义(P0.01);而HFD+GW9662+Rb1组肥胖小鼠的血糖调节能力较HFD+Rb1组弱,差异有统计学意义(P0.01)4.HFD+Rb1组肥胖小鼠血清中游离脂肪酸水平明显低于其他组,但TG、LDL-C、HDL-C、CHO以及血糖水平无明显统计学差异。5.与对照组相比,HFD+Rb1组肥胖小鼠血清中AST和ALT水平较低,差异有统计学意义(P0.05),HFD+Rb1组肥胖小鼠血清AST水平低于HFD+GW9662+Rb1组,差异有统计学意义(P0.05),而ALT水平未见明显统计学差异6.Rb1处理组肥胖小鼠的脂肪细胞直径明显较对照组以及HFD+GW9662+Rb1组小,差异有统计学意义(P0.01),HFD+DMSO+Rb1组肥胖小鼠脂肪细胞直径明显小于HFD+GW9662+Rb1组,差异有统计学意义(P0.01)。7.HFD+Rb1组肥胖小鼠脂肪总蛋白中AQP7、PPARγ、p-PPARγ蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05)以及HFD+GW9662+Rb1组(P0.01),差异有统计学意义。HFD+DMSO+Rb1组中上述蛋白表达水平均高于HFD+GW9662+Rb1组,但四组肥胖小鼠脂肪蛋白中p-PPARγ(ser112)/PPARγ水平未见明显差异。8.体外实验中,经不同浓度刺激分化成熟3T3-L1细胞,筛选出最适Rb1作用浓度为40umol/L。9.体外实验中,人参皂苷Rb1处理组以及DMSO+Rb1处理组的分化成熟3T3-L1细胞中脂滴大小明显较对照组以及GW9662+Rb1组小,且Rb1组与DMSO+Rb1组培养基中游离三酯甘油水平较其他两组高。10.与对照组相比,人参皂苷Rb1处理组促进分化成熟3T3-L1脂肪细胞脂联素的分泌(P0.05),抑制瘦素的分泌(P0.01),差异有统计学意义。11.体外实验中,人参皂苷Rb1处理组的分化成熟3T3-L1脂肪细胞蛋白中AQP7、PPARγ、p-PPARγ表达水平明显较对照组高,且DMSO+Rb1组上述蛋白表达水平高于GW9662+Rb1组,差异有统计学意义(P0.01),但四个组p-PPARγ(ser112)/PARγ表达水平未见明显统计学差异。结论1.人参皂苷Rb1明显减轻肥胖小鼠的体质量、降低体脂重量,减小脂肪细胞大小,降低肥胖小鼠血清中游离脂肪酸水平,且有保护肥胖小鼠肝功能的作用;2.人参皂苷Rb1促进分化成熟3T3-L1脂肪细胞内三酯甘油的排出,改善分化成熟3T3-L1脂肪细胞内分泌功能,促进脂联素分泌,减少瘦素分泌;3.人参皂苷Rb1通过PPARγ影响AQP7表达,最终发挥调节脂质转运的作用。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1 人参皂苷 Rb1 减轻肥胖小鼠体质量。A 实验动物处理时间轴；B 每周小鼠体质量变化。*P<0.05 vs Chow，**P<0.01 vs Chow，#P<0.05 vs HFD+Rb12.人参皂苷 Rb1 对肥胖小鼠脂肪组织中 AQP7、PPARγ 表达的作用观察到人参皂苷 Rb1 能够改善小鼠的肥胖状态，为了检测 Rb1 是否影响三酯甘油的运输蛋白，我们检测高脂饮食小鼠脂肪组织中 AQP7 以及 PPARγ的表达量，与高脂对照组(Control)相比,高脂+Rb1 组的 AQP7 以及 PPARγ 表达量明显增加。

37图 3 人参皂苷 Rb1 能减轻肥胖小鼠体质量，且此作用与 PPARγ 途径密切相关。A 为四个肥胖小鼠大体图；B 为药物处理后肥胖小鼠体质量变化，药物处理起始时间为图 3B 箭头所指时间。*P<0.05 vs HFD+Rb1，#P<0.05(HFD+Rb1 vs HFD+GW9662+Rb1)4.人参皂苷 Rb1 对肥胖小鼠体脂率的影响肥胖是一定程度的体质量过重和脂肪层过厚的一种状态，除了体质量外，全身脂肪的含量的多少来衡量肥胖更为直接，即为体脂量。而体脂率=体脂/体质量，反映了脂肪占据体质量的百分比，是反应肥胖的一个重要参数，比体

质量更能体现肥胖中脂肪的含量且更符合肥胖的定义。所以我们检测了脂肪组织的重量，并计算体脂率，图 4A 为四组小鼠两侧皮下脂肪大体图，图中可见高脂喂养小鼠中 Rb1 组与 DMSO+Rb1 组肥胖小鼠附睾脂肪明显较其他两组小，图 4B 结果显示：与对照组(Control)相比，高脂+Rb1 组(Rb1)体脂率明显降低；与 Rb1 组相比较，高脂+GW9662+Rb1 组(GW9662+Rb1)体脂率明显增加 ， 及 Rb1 减 少 体 脂 率 的 作 用 部 分 被 GW9662 逆 转 ； 而 高 脂+DMSO+Rb1(DMSO+Rb1)组对比高脂+GW9662+Rb1 组(GW9662+Rb1)的体脂率也是明显降低的，及 DMSO 溶剂不影响脂肪组织重量；且 Rb1+GW9662组比较 Control 组以及 Rb1 组比较 Rb1+DMSO 组的体脂率都未见明显差异，排除了 DMSO 溶剂对脂肪组织重量的影响。
【参考文献】

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1 Yu-Meng Li;Hai-Bin Wang;Jin-Guang Zheng;Xiao-Dong Bai;Zeng-Kai Zhao;Jing-Yuan Li;Sen Hu;;Dimethyl sulfoxide inhibits zymosan-induced intestinal inflammation and barrier dysfunction[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

2 郭莹莹;边云飞;肖传实;;脂联素在代谢综合征及心血管疾病中的研究进展[J];中国动脉硬化杂志;2015年05期

3 吴光雨;李华婷;贾伟平;;脂质运载蛋白2联系肥胖和心血管疾病的临床证据和分子机制[J];医学综述;2014年20期

4 宋扬;吴荣;;PPARγ磷酸化与非磷酸化的研究进展[J];医学综述;2014年03期

5 尚文斌;于希忠;王国强;赵娟;;人参皂苷Rb_1改善高脂喂养肥胖小鼠胰岛素抵抗和脂肪异位沉积[J];中国中药杂志;2013年23期

6 陈丽;兰珍;张丹;;不同肥胖标准在评估多囊卵巢综合征胰岛素抵抗中的价值[J];四川大学学报(医学版);2013年06期

7 魏丹;徐志鹏;薛耀明;;人类棕色脂肪的分布、影响因素及生理学作用[J];实用医学杂志;2013年17期

8 于佳雪;徐亚伟;肖丹;陈清勇;毛春莉;;游离脂肪酸与心血管疾病[J];现代生物医学进展;2013年10期

9 齐美玲;赵越;;PPARγ辅调节因子与脂代谢关系的研究进展[J];生命科学;2012年10期

10 崔秋英;霍丽静;贾敏;赵晓云;;高脂饮食中不同脂肪酸类型与胰岛素敏感性的相关性研究[J];现代预防医学;2013年09期

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本文编号：2836528