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光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

发布时间:2020-10-13 20:15
   目的:探讨光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:以0、1、2.5、5、10和20μmol/L光甘草定作用于体外培养的Hela细胞24 h后,采用细胞计数(CCK-8)法检测细胞存活率并计算出光甘草定的半抑制浓度。将体外培养的Hela细胞分别以0、2.5和5μmol/L光甘草定处理后,采用Transwell小室检测细胞侵袭变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和生存素(Survivin)的表达情况。结果:与对照(0μmol/L)组相比,1、2.5、5、10和20μmol/L光甘草定处理组细胞存活率均明显降低(P0.05),且呈浓度依赖性;同时,光甘草定对Hela细胞的半抑制浓度为4.56μmol/L。与对照(0μmol/L)组相比,2.5和5μmol/L光甘草定处理组中侵袭细胞数和细胞在S期与G_2/M期的百分比以及细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1、MMP-2、Survivin蛋白的表达水平均明显减少,而细胞凋亡率和细胞在G_0/G_1期百分比明显升高(P0.05),且5μmol/L光甘草定处理组细胞的变化更为显著。结论:光甘草定可抑制Hela细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。
【部分图文】:

细胞,结晶,甘草,百分比


流式细胞仪检测结果(表4)显示,与对照(0 μmol/L)组相比,2.5和5 μmol/L光甘草定处理后Hela细胞在G0/G1期百分比明显升高,而在S期和G2/M期的百分比明显降低(P<0.05),且随着光甘草定浓度的升高,细胞在不同时相的变化越明显。表2 各组中侵袭细胞数的比较Tab.2 Comparison of number of invasive cells in each group Concentration(μmol/L) Number of invasive cells ( x ˉ ±s) 0 96.85±8.13 2.5 72.36±5.05* 5 50.28±3.35* F 47.500 P 0.000 注:与0 μmol/L相比,*P<0.05。Note:Compared with 0 μmol/L,*P<0.05.

细胞凋亡,细胞,甘草,蛋白C


免疫 印迹法检测结果(图3和表5)显示,与对照( 0 μmol/L)组相比,2.5和5 μmol/L光甘草定处理组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin以及下游靶蛋白CyclinD1、 MMP-2和Survivin的表达水平均明显降低(P<0.05),且5 μmol/L光甘草 定的作用效果较2.5 μmol/L更明显。表3 各组细胞凋亡率的比较Tab.3 Comparison of apoptosis rate in each group Concentration(μmol/L) Apoptosis rate (%, x ˉ ±s) 0 5.48±0.36 2.5 21.15±2.28* 5 32.42±2.75* F 127.806 P 0.000 注:与0 μmol/L相比,*P<0.05。Note:Compared with 0 μmol/L,*P<0.05.

相关蛋白,信号通路,宫颈癌


我国宫颈癌的发病率占女性恶性肿瘤的第七位,死亡率占第八位,且呈上升和年轻化趋势,严重威胁着女性的身体健康和生活质量[8];多数宫颈癌患者就诊时已为晚期,错失了手术根治性治疗的最佳时期,尽管放化疗在宫颈癌治疗方面取得了较为肯定的临床效果,但也存在着一些脱发、神经损伤和肾毒性等不良反应,极大地限制了其临床应用[9,10]。长期以来,中药廉价、低毒、高效等优势使其在肿瘤防治过程中占有重要地位,越来越多的中药提取物、中药单体成分和中药复方等被证实可通过抑制肿瘤细胞增殖转移、诱导细胞凋亡和逆转肿瘤多药耐药等发挥抗宫颈癌作用,在临床治疗中具有良好的应用价值[11]。因此,不断寻找新的、有效的中药抗宫颈癌成分对临床防治宫颈癌具有重要意义。表5 各组细胞中Wnt1、β-catenin、Survivin、MMP-2和CyclinD1蛋白表达水平的比较 ( x ˉ ±s) Tab.5 Comparison of Wnt1,β-catenin,Survivin,MMP-2 and CyclinD1 protein expression levels in each group ( x ˉ ±s) Concentration(μmol/L) Wnt1 β-catenin Survivin MMP-2 CyclinD1 0 0.68±0.04 0.77±0.05 0.92±0.06 0.73±0.03 0.85±0.06 2.5 0.29±0.02* 0.36±0.03* 0.52±0.04* 0.41±0.03* 0.48±0.03* 5 0.08±0.02* 0.15±0.02* 0.11±0.02* 0.13±0.02* 0.22±0.03* F 347.625 235.500 263.625 368.727 167.056 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 注:与0 μmol/L相比,*P<0.05。Note:Compared with 0 μmol/L,*P<0.05.
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