富硒木耳水提物对糖尿病小鼠肾损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2020-10-13 23:10

　　 目的:糖尿病肾损伤是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者最常见、也是最严重的并发症之一。为观察富硒木耳水提物(aqueous extract of Se-enriched A.Auricularia,AESAA)对糖尿病小鼠肾损伤的影响,并探讨AESAA对糖尿病肾损伤保护作用的机制,以普通木耳水提物(aqueous extract of A.Auricularia,AEAA)做对照,进行了本项研究。方法:(1)水提取、冷冻干燥法制备AESAA和AEAA冻干粉,采用电感耦合等离子质谱法(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)对AESAA和AEAA中硒含量进行测定。(2)采用1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)清除试验、羟自由基清除试验、超氧自由基清除试验和还原力试验共同评价AESAA的体外抗氧化能力。(3)试验选取60只B57C/6J小鼠,采用高脂饲料饲喂并联合单次剂量注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方式构建Ⅱ型糖尿病小鼠模型,根据人体对硒的最大耐受量设计小鼠给药剂量。(4)灌胃给药8周后,处死小鼠。观察AESAA对糖尿病小鼠口服糖耐量及血脂的影响;观察AESAA对糖尿病小鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)含量的影响;病理切片评价AESAA对小鼠肾脏病理变化的影响。(5)试剂盒检测糖尿病小鼠血清及肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的水平变化,观察AESAA对糖尿病小鼠体内氧化应激状态的影响。(6)酶联免疫法检测糖尿病小鼠血清及肾组织中的炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的含量变化,观察AESAA对糖尿病小鼠体内炎症因子的影响。(7)采用Western blot法研究AESAA对糖尿病小鼠肾组织中RAGE、p-Erk、p-JNK、p-P38、p-NF-κB蛋白表达的影响,并经免疫组化法对肾组织中RAGE的表达进行验证,确定AESAA对糖尿病肾损伤保护作用的机制。结果:(1)成功制备AESAA和AEAA冻干粉,AESAA中的硒含量为31.79 mg/kg,AEAA中的硒含量为4.4 mg/kg。(2)在4种抗氧化体系中,AESAA的抗氧化能力均明显高于相同浓度的AEAA。其中,AESAA对DPPH自由基和羟自由基具有较强的清除能力,清除率分别为66.85%和64.69%。(3)成功建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。(4)AESAA低剂量能降低糖尿病小鼠血糖水平(P0.05),改善糖尿病小鼠口服糖耐量;AESAA低、高剂量能够显著降低糖尿病小鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平(P0.01),增加高密度脂蛋白(HDL-C)水平(P0.01),有效改善糖尿病小鼠脂质紊乱;AESAA低、高剂量降低糖尿病小鼠肾小球系膜基质和空泡,且血清中肾功能指标BUN、Cr(P0.01)和UA的水平(P0.05)较模型组小鼠明显降低。(5)AESAA低、高剂量能升高糖尿病小鼠血清及肾组织中GSH-Px(P0.05,P0.01)、CAT(P0.05,P0.01)的活性并降低MDA(P0.05,P0.01)的含量,改善糖尿病小鼠高糖引起的氧化应激状态。(6)AESAA低、高剂量能降低糖尿病小鼠血清及肾组织中炎症因子TNF-α(P0.01)、IL-1β(P0.05,P0.01)和IL-6(P0.01)的水平。(7)Western blot和免疫组化结果显示:AESAA能降低糖尿病小鼠肾组织中RAGE、p-JNK、p-Erk、p-P38、p-NF-κB蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:AESAA通过改善氧化应激和减少炎症减轻糖尿病小鼠的肾损伤,其机制可能是抑制RAGE/MAPK/NF-κB信号通路反应实现的。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

将升温至 160 ℃继续消解直至观察到消解瓶中剩余 0.5 mL 溶液左右，恢复室温后加超纯，每个样品重复三次。ICP-MS 仪器工作条件表 1-1 ICP-MS 仪器工作条件Tab.1-1 The operating conditions of ICP-MS设定条件 工作参数 1500 W 数据采集次数 0.9 L/min 进样深度 0.25L /min 蠕动泵速 0.8 L/min S/C 温度 图 1.1）计算 AESAA 及普通木耳水提物中的硒含量为 31.79 mg/kg，AEAA 中的总硒含量Y=1.370E-0.004*X+3.805E-0.05）

图 2.1 AESAA、AEAA 及 Vc 对 DPPH 自由基的清除能力ure 2.1 the DPPH scavenging ability of AESAA, AEAA an能力 及 Vc 对羟自由基清除能力的结果见图 2.2。在上升。AESAA 对 OH·清除能力高于 AEAA，在 OH·清除率分别为 64.69%、47.97%。IC50 分别图 2.2 AESAA、AEAA 及 Vc 对羟自由基的清除能力re 2.2 the hydroxyl scavenging ability of AESAA, AEAA

17图 2.2 AESAA、AEAA 及 Vc 对羟自由基的清除能力ure 2.2 the hydroxyl scavenging ability of AESAA, AEAA 除能力测定A 及 Vc 对超氧自由基清除能力的结果见图 2.3。超氧自由基的清除率很低。当浓度在 3.0 mg/m 48.3%，尚未达到理想水平。图 2.3 AESAA、AEAA 及 Vc 对 DPPH 自由基的清除能力.3 the Superoxide Free radical scavenging ability of AESAA
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本文编号：2839827