新疆两色金鸡菊总黄酮化学成分及其生物活性研究

发布时间：2020-10-16 01:33

　　 目的:本论文旨在提取和纯化新疆两色金鸡菊总黄酮,同时建立纯化总黄酮有效部位的UPLC化学成分分析与含量测定方法;另外,考察总黄酮中化学成分的清除自由基、抗氧化以及抑制α-葡萄糖苷酶活性的能力,为两色金鸡菊新药研发,以及其体内药物代谢动力学的研究提供基础依据。方法:(1)采用响应面分析(Response Surface Analysis Methodology,RSM)法超声波提取总黄酮,Box-Behnken中心组合设计模型优化,确定超声波提取参数,通过XDA-1、NKA-10、AB-8等10余种大孔吸附树脂对提取总黄酮的吸附和解吸性能的考察,筛选出具有较强的吸附性能和较好的解吸能力的大孔树脂,纯化与富集总黄酮有效部位。(2)采用UPLC-PDA对大孔吸附树脂纯化后总黄酮进行定性分析,采用ACQUITY UPLC?HSS T3(1.8μm,2.1×100 mm),以乙腈-0.5%甲酸水为流动相,流速0.2 ml·min-1,进样体积1μl,温度30o C,检测波长280 nm,确定总黄酮含有的化学成分,建立各化学成分纯化前后的含量测定方法,分别获得各化学成分含量。(3)采用薄层色谱-生物自显影(Thin Layer Chromatography Bioautography,TLC-Bio)技术跟踪检识新疆两色金鸡菊纯化总黄酮中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的活性有效成分,建立总黄酮体外清除自由基,抗脂质过氧化和α-糖苷酶活性抑制的实验方法。结果:(1)经过对超声时间、液料比、乙醇浓度这三个条件优化后,确定为液料比21:1、提取时间30 min、乙醇浓度60%,获得质量较稳定、含量较高的总黄酮提取物,提取率平均可达4.65%;筛选出AB-8型大孔吸附树脂对新疆两色金鸡菊总黄酮进行纯化富集:总黄酮上样浓度为0.54 mg·ml-1,上样量为树脂体积的2.1 BV,吸附平衡4 h,2~3 BV蒸馏水冲洗柱床,2.2 BV的50%乙醇洗脱,分段收集,可获得较高含量的总黄酮有效部位。(2)在新疆两色金鸡菊纯化总黄酮定性分析中,确定纯化后总黄酮含有以下种物质:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、黄酮奥卡宁、马里苷、奥卡宁、木犀草素、槲皮素,分别测定含量,其线性范围分别10.04-100.4μg·ml-1、2.51-40.16μg·ml-1、49.80-298.80μg·ml-1、49.80-298.80μg·ml-1、2.51-40.16μg·ml-1、50.00-300.00μg·ml-1、64.00-384.00μg·ml-1、50.20-301.20μg·ml-1、2.48-39.68μg·ml-1、2.50-40.00μg·ml-1在浓度范围内线性关系良好(r值均0.999),加样回收率均在98%-100%。(3)在TLC-Bio方法筛选总黄酮生物活性成分的实验中,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8:7.4:3)为展开剂,分别以DPPH与ABTS甲醇溶液进行显色,检识分析大孔吸附树脂纯化后总黄酮中具有抗氧化作用成分;以相同薄层色谱条件展开纯化总黄酮,以α-葡萄糖苷酶为酶源,以对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(p NPG)为底物,以固蓝B盐为显色剂,日光下检识到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的化学成分;纯化后总黄酮体外清除DPPH、ABTS与抗脂质过氧化的能力(IC50)依次是,(58.75±2.549)、(23.13±0.0004)与(19.74±1.09)μg·ml-1;采用p NPG法测定α-葡萄糖苷酶与大鼠小肠α-糖苷酶群的抑制活性,其IC50分别为(46.79±9.024)与(0.771±7.735)mg·ml-1。结论:(1)响应面分析法优化超声波提取总黄酮工艺参数,可获得较高含量的总黄酮提取物;AB-8型大孔吸附树脂对两色金鸡菊总黄酮有效部位具有较好的纯化富集作用。(2)总黄酮中含有的马里苷、黄诺马苷、奥卡宁、黄酮奥卡宁具有较好自由基清除能力与α-葡萄糖苷酶活性抑制能力;(3)纯化后总黄酮对DPPH、ABTS、超氧阴离子自由基与脂质过氧化均有具有较强的抗氧化活性,可作为一种新的自由基清除剂和天然抗氧化剂;纯化后总黄酮具有作为新型α-葡萄糖苷酶抑制剂与抗氧化剂的药用开发价值。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.1;R285
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号表
前言
第一章 两色金鸡菊总黄酮的提取、纯化工艺
    1.1 响应面分析法优化超声波提取总黄酮工艺
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 方法与结果
        1.1.3 讨论
        1.1.4 小结
    1.2 两色金鸡菊总黄酮纯化工艺
        1.2.1 实验材料
        1.2.2 方法与结果
        1.2.3 讨论
        1.2.4 小结
第二章 两色金鸡菊总黄酮化学成分分析及其含量测定
    2.1 实验材料
        2.1.1 仪器与试剂
        2.1.2 对照品与药材
    2.2 实验方法与结果
        2.2.1 供试品溶液的制备
        2.2.2 对照品溶液的制备
        2.2.3 色谱条件
        2.2.4 定性分析
        2.2.5 含量测定及方法学考察
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 两色金鸡菊总黄酮成分生物活性研究
    3.1 薄层色谱-生物自显影技术考察总黄酮中活性成分
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 方法与结果
        3.1.3 讨论
        3.1.4 小结
    3.2 总黄酮抗氧化活性研究
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法与结果
        3.2.3 讨论
        3.2.4 小结
    3.3 总黄酮糖苷酶抑制活性研究
        3.3.1 实验材料
        3.3.2 方法与结果
        3.3.3 讨论
        3.3.4 小结
全文总结
文献综述
参考文献
致谢
作者简介
附件

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 王菲;山显彤;张家境;王战勇;;响应面法优化白花菜中黄酮类化合物的提取研究[J];辽宁石油化工大学学报;2017年01期

2 高飞;陈芳;马旗联;郝丽莉;刘江云;李雅丽;杨世林;;HPLC同时测定雪菊中4种黄酮类成分[J];中国实验方剂学杂志;2016年20期

3 古扎力努尔·艾尔肯;王健;兰怡;李新霞;李琳琳;王烨;毛新民;;两色金鸡菊花提取物的抗氧化活性测定及TLC-Bio分析抗氧化活性成分[J];新疆医科大学学报;2016年07期

4 木合塔尔·吐尔洪;买买提·吐尔逊;热萨莱提·伊敏;楚刚辉;木尼热·阿不都克力木;;RP-HPLC法同时测定昆仑雪菊中绿原酸、芦丁、槲皮素和木犀草素的量[J];中草药;2016年09期

5 姚新成;王新兵;张婷;陈文;唐辉;;新疆两色金鸡菊总黄酮含量测定显色反应体系[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2015年03期

6 邱佳俊;高飞;李雅丽;刘江云;木胡牙提·乌拉斯汉;郝丽莉;杨世林;;雪菊总黄酮抗氧化活性研究[J];中国现代中药;2015年05期

7 袁辉;赵建勇;杨文菊;;新疆不同产地雪菊UPLC指纹图谱的建立及其成分测定[J];中草药;2015年08期

8 姚新成;张婷;石瑞坤;王贝贝;陈文;;新疆两色金鸡菊中总黄酮含量测定方法的研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2015年02期

9 梁乐;李琳琳;古扎力努尔·艾尔肯;李新霞;毛新民;;薄层生物自显影技术筛选两色金鸡菊中的活性成分[J];药物分析杂志;2015年03期

10 刘爱敬;廖争争;郭琳;赵旭;毕开顺;贾英;;大孔树脂纯化黄秋葵黄酮及其体外抗氧化活性研究[J];食品工业科技;2015年16期

相关博士学位论文 前1条

1 阿赛古丽;昆仑雪菊化学成分分析和多糖的提取及活性研究[D];甘肃农业大学;2014年

相关硕士学位论文 前1条

1 张发强;雪菊化学成分的提取分离与结构鉴定[D];吉林大学;2014年

本文编号：2842546