运脾开胃法对进食障碍胃肠动力及食欲调控机制的研究

发布时间：2020-10-16 13:52

　　 研究目的:基于胃肠动力及食欲调控机制,探讨运脾开胃法治疗进食障碍的效应及深层机理。研究方法:建立厌食症大鼠模型,通过腹腔注射受体拮抗剂干扰VIP、Ghrelin信号通路传导,观察运脾开胃方对大鼠进食量及体重的影响。采用ELISA、SP、WB、qPCR等方法检测血清及胃肠组织VIP、Ghrelin、VPAC2、GHSR等下游信号及脑组织Ghrelin、NPY、AgRP、POMC、CART的表达,观察工具药对VIP、Ghrelin信号通路及中枢食欲激素的作用。采用酚红吸光度测定法检测工具药成分柚皮苷对小鼠胃排空的影响,并运用激光共聚焦技术检测柚皮苷对细胞Ca2+的影响。结果:(1)效应观察:造模14周后,大鼠进食量及体重显著下降,治疗4周后,运脾开胃组进食量及体重显著增加,优于自然恢复组及受体拮抗组;(2)VIP信号通路:造模后,大鼠血清、胃组织VIP水平无差异,肠组织VIP及胃肠组织VPAC2表达显著下调,胃组织磷酸化CaM比例显著增加;经治疗,胃组织VPAC2显著上调,受体拮抗后作用减弱,磷酸化CaM比例显著下降;(3)Ghrelin信号通路:造模后,血清、胃肠Ghrelin以及肠组织GHSR有所下降,但差异无统计学意义,胃组织GHSR及胃肠组织p-MLC显著下降;经治疗,血清、胃组织Ghrelin显著增加,拮抗GHSR后进一步升高,胃组织GHSR有所上调,但差异不具有统计学意义,拮抗GHSR后显著上调,肠组织GHSR显著上调,恢复至正常水平,而GHSR拮抗后作用减弱,胃肠组织p-MLC显著升高,且在胃组织中拮抗GHSR后效应减弱;(4)中枢食欲激素:造模后NPY、AgRP、POMC、CART出现下降,运脾开胃方干预后显著升高,拮抗GHSR后作用减弱;(5)胃排空:柚皮苷灌胃后,小鼠胃排空率显著升高,但低于莫沙比利组,拮抗GHSR后效应减弱;(6)细胞Ca2+:柚皮苷干预人胃窦平滑肌细胞15s引起Ca2+内流,GHSR拮抗后内流受抑制。结论:(1)运脾开胃方能够显著提高厌食症模型进食量,抑制体重下降,干扰VIP、Ghrelin信号通路后作用减弱;(2)运脾开胃方通过上调VIP受体VPAC2在胃组织的表达,影响重要信号蛋白CaM表达,进而促进平滑肌舒张,调节胃肠动力;(3)运脾开胃方通过提高血清及胃组织Ghrelin水平、上调胃肠组织GHSR、p-MLC的表达来发挥其促进食欲与调节胃肠动力的作用;(4)运脾开胃方能够调节中枢食欲激素表达,改善食欲调控紊乱;(5)柚皮苷能够促进小鼠胃排空及细胞Ca2+内流,调节胃肠动力。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

造模第?６?周?２６．１２±７．２８?２４．６１±７．０６?２３．８８±６．０３?２４．８０±４．５７?２３．８４＋７．８８?２４．４７＋６．１４??造模第?７?周?２７．３４±６．７２?２３．１１±５．８１?２３．７０±５．７９?２３．５１±３．２６?２３．５３±７．０１?２３．０６±５．９７??造模第?８?周?２６．４６±７．６１?２０．９２＋５．２８?２０．７４±４．２０?２１．４２±４．５２?２１．１３±４．７４?２１．５６±４．２２??造模第?９?周?２５．２５±６．５３?２１．２２±７．１４?２１．２７±６．２６?２１．７１±５．６２?２０．７７?＋?７．４?１?２１．７３?＋?５．５３??造模第?１０?周?２５．６１±７．７４?２０．６８±６．８６?２０．３１?土６．６３?１９．６２±５．２９?２０．２１±５．４２?１９．７０±５．３２??造模第?１１?周?２４．９６±７．１２?Ｉ６．６１±３．０６＊?１６．４２±３．５６＊?１６．４０?士?３．２８＊?１６．４５±３．５１＊?１６．４０±３．２８＊??造模第?１２?周?２２．４０±５．９９?１５．１９±３．２２＊?１５．１６±３．１２＊?１５．５８±３．７９＊?１５．３０±３．９５＊?１５．４３±４．２１＊??造模第?１３?周?２２．２１?土５．９２?１７．８１±２．７４?１７．６４±２．９０?１７．８１±３．４６?１７．６３±３．３０?１７．７４＋３．３１??造模第?１４?周?２３．７９±６．４０?１７．２２＋５．２５?１７．７３±４．９８?１７．４１±５．６８?１７．４６±５．３９?１７．１６?＋?５．１３??治疗第?１?周?２６．０５±７．８８?１８．０５±４．９１?１８．４２

２?ＶＩＰ信号通路??２．１材料??２．１．１实验动物??大鼠购买及饲养同前。??２．１．２药物制备??运脾开胃方剂量、质量控制及制备同前。??２．１．３动物饲料??特殊饲料制备同前。??２．１．４试剂和抗体??实验所需主要试剂及抗体见表３－２－１。??１８??

图３－２－１?ＶＩＰ四参数Ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线拟合及标准曲线??．２．４免疫组化法检测胃肠组织ＶＩＰ表达??采用免疫组织化学法（ＳＰ法）检测胃肠组织中ＶＩＰ表达，简要步骤如下：??（１）胃肠组织经４％多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。??（２）石蜡切片常规脱蜡至水。??（３）?ＰＢＳ?洗涤?２?遍，各?５ｍｉｎ。??（４）抗原修复。??（５）用ＰＢＳ配置新鲜的３％Ｈ２０２，室温封闭ｌＯｍｉｎ，蒸馏水洗１次。??（６）?ＰＢＳ?洗?５ｍｉｎ。??（７）滴加５％牛奶封闭液，室温ｌＯｍｉｎ。??（８）甩掉多余液体后加一抗４°Ｃ过夜。??（９）第二天?３７°Ｃ复温?４５ｍｉｎ。??（１０）同步骤（３）。??（１１）加入生物素化的二抗，３７°Ｃ孵育３０ｍｉｎ。??（１２）同步骤（３）。??°
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本文编号：2843342