强心活力方对慢性心力衰竭大鼠作用及机制研究

发布时间：2020-10-17 20:30

　　 目的:本研究拟于在慢性心衰大鼠模型上应用酶联免疫吸附法、免疫组化、荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western blot)等方法,研究强心活力方是否通过调节MAPK信号通路减轻心肌重构机制,以论证强心活力方可以抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化,探索强心活力方治疗慢性心力衰竭的机制。本课题的研究结果将为开发国家中药新药寻找新的作用靶点、奠定理论基础,进而对慢性心力衰竭的防治做出更多贡献。方法:(1)冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠慢性心力衰竭模型,按体重随机分为正常组、假手术组、模型组、参附对照组及强心活力方高、中、低剂量组。(2)右侧颈动脉插管检测血流动力学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验大鼠血清脑钠肽含量。(3)通过慢性心衰大鼠心肌组织病理切片苏木素-伊红染色、透射电镜及马松(Masson染色)观察病变大鼠心肌组织和心肌细胞形态学变化及心肌纤维化程度。(4)蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌组织转化生长因子-β1、活化蛋白激酶1、磷酸化的p38的蛋白表达,荧光定量PCR检测大鼠心肌组织转化生长因子-β1、活化蛋白激酶1、p38蛋白表达。结果:(1)对血流动力学的影响:与模型组相比,各治疗组血流动力学指标均有不同程度的改善,其中高剂量组改善最为明显,有显著性差异(P0.01)。(2)对血清脑纳肽的影响:与模型组比较,各治疗组血清BNP含量显著降低,高剂量组降低最为明显,差异有统计学意义(P0.05)。(3)显微镜下观察苏木素-伊红染色和马松Masson染色病理切片显示模型组较正常组、假手术组差异明显,强心活力方高剂量组改善心肌结构,细胞形态,抑制心肌纤维化方面效果突出。(4)对Bax、caspase-3及Bc1-2表达的影响:与模型对照组比较,各治疗组心肌细胞凋亡数量明显减少,Bax、Caspase3蛋白表达明显下降,Bc1-2明显升高。(5)转化生长因子-β1(TGFβ 1)、活化蛋白激酶1(TAK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)表达的影响:本实验研究显示与正常组、假手术组比较,心衰模型组大鼠心肌组织中的转化生长因子-β1、活化蛋白激酶1、p38丝裂原活化蛋白激酶均出现异常的高表达状态,都有显著性差异。与模型组比较,强心活力方高、中、低剂量组及参附对照组转化生长因子-β 1、活化蛋白激酶1、p38丝裂原活化蛋白激酶表达有显著性差异,均有抑制作用,尤其高剂量组对转化生长因子-β1、p38丝裂原活化蛋白激酶表达抑制更为明显,治疗后也可接近正常表达水平。但对活化蛋白激酶1表达影响不明显,原因有待进一步研究。结论:强心活力方标本兼顾,温阳益气、活血利水,组方精良,可明显改善慢性心力衰竭大鼠的心功能指标和心肌组织形态;强心活力方能有效抑制促细胞凋亡蛋白Bax及caspase-3表达,增加抗凋亡蛋白Bc1-2表达,从而减轻心肌细胞凋亡;强心活力方抑制心肌重构的作用机制可能与下调转化生长因子-β 1的表达,进而抑制p38MAPK信号通路有关;实验结果支持TGFβ 1/p38MAPK通路,但没有支持TGFβ 1-TAK1-p38MAPK通路,可能是由于P38除了受活化蛋白激酶1激活也受其他MAPKKK激活,在TGFβ1、p38之间通过什么激活需要进一步实验论证。总之,强心活力方改善心肌重构,有效治疗慢性心力衰竭,对此病的防治意义重大,建议临床选用此方。
【学位单位】：长春中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

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【参考文献】

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本文编号：2845284