青胡桃质量标准及生物活性研究

发布时间：2020-10-19 19:48

　　 青胡桃为胡桃科植物胡桃(Juglans regia L.)的新鲜或干燥幼果,具有清热解毒、消肿止痛、乌发等功效,在民间主要用于治疗牙痛,痛经,肝胃气痛,癌症痛,胃神经痛,急、慢性胃痛,腹痛,须发早白等。青胡桃药材收录于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》,但青胡桃药材的含量测定项还尚未完善,青胡桃药材的深度开发利用受到限制。为了改变现状,本课题以青胡桃药材为研究对象,以《中国药典》2015版第四部中药材质量控制通则为指导,对青胡桃药材的质量标准进行研究实验,实验内容及结果如下:1.青胡桃药材中总黄酮含量测定及抗氧化活性研究总黄酮类化合物为青胡桃的主要化学成分之一,此章节对青胡桃总黄酮提取方法进行优化。首先对显色条件进行优化,再进行单因素实验考察,最后进行3因素3水平正交实验。结果表明,青胡桃总黄酮的最佳提取方法为:提取时间90min,溶剂浓度55%,料液比(g·m L~(-1))为1:30。应用此方法测得贵州省10批不同产地青胡桃总黄酮含量在9.36~9.61%之间。以ABTS自由基清除能力和DPPH自由基清除能力做为指标,对青胡桃总黄酮抗氧化活性进行评价。得出在一定浓度范围内,青胡桃总黄酮含量与ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力呈正相关。不同产地青胡桃对ABTS自由基和DPPH自由基清除能力的影响不显著。2.青胡桃药材的指纹图谱研究此部分采用高效液相色谱法建立了贵州省青胡桃指纹图谱的测定方法。应用本方法对贵州省12批不同产地青胡桃药材进行测定,其中10批青胡桃药材的相似度在0.9以上,只有两批药材出现稍微差异。得出贵州省青胡桃药材具有较好的稳定性,为贵州省青胡桃药材的质量控制、研究与开发提供科学依据。3.青胡桃质量标准研究根据《中国药典》2015版中相关规定,全面的对青胡桃药材水分、灰分、浸出物及重金属含量进行测定;采用放大镜对青胡桃性状进行研究;采用显微镜对其进行显微鉴别;采用紫外分光光度对其总黄酮含量进行测定。参考相关资料及相应医药书籍,对青胡桃药材的中药属性、主要功效和储存方法进行总结。综合以上中药材质量标准研究结果,参照《中国药典》2015年版相关通则,撰写贵州省青胡桃药材的质量标准草案,为大力开发贵州省青胡桃药材提供科学依据。4.青胡桃提取物的体外活性研究此部分采用响应面法对青胡桃总黄酮含量与得膏率的平均权重进行优化,得最佳前处理条件为:提取时间75.27 min,溶剂浓度50.63%,料液比(g·m L-1)为1:32.07,总黄酮含量为9.84%,得膏率为28.07%,平均权重为18.95%。对乙醇,石油醚,乙酸乙酯和水制备的青胡桃萃取液进行体外抗肿瘤活性、抗氧化活性研究。结果表明,在体外抗氧化研究中,青胡桃萃取液的抗氧化能力存在明显差异。青胡桃萃取液清除DPPH、ABTS自由基能力大小顺序为:乙醇提取物水萃取部分乙酸乙酯萃取部分石油醚萃取部分。青胡桃提取物对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制能力的排序为乙酸乙酯萃取部分石油醚萃取部分乙醇提取物水萃取部分;青胡桃提取物对人胃癌MKN45细胞的生长抑制能力的排序为石油醚萃取部分乙酸乙酯萃取部分乙醇提取物水萃取部分。青胡桃提取物对Hela细胞和MKN45细胞的生长抑制效果与给药浓度均具有量效关系,呈现正相关。青胡桃提取物体外活性的初步筛选,为贵州青胡桃的进一步开发利用与深入研究提供参考依据。
【学位单位】：贵州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;O657.72
【部分图文】：

每个因素对总黄酮提取的影响顺序为提取时间（A）>溶剂浓度（B）>料液比（C）。三因素三水平优化水平组合为 A3B2C2，本实验青胡桃总黄酮最佳提取方法为精密称取青胡桃药材（100 目）2 g，以液料比 30:1 加入 55%乙醇溶液，超声功率300 W，超声时间 90 min，提取 2 次，室温放冷后以 55%乙醇溶液补重，离心后过滤，合并上层滤液。表 2-5 正交实验结果分析Table 2-5 Analysis of orthogonal experimental results源 III 型平方和 df 均方 F Sig. 显著性校正模型 13.429a6 2.238 121.125 0.008 **截距 426.147 1 426.147 23062.687 0.000 **A 7.843 2 3.921 212.227 0.005 **B 4.173 2 2.086 112.915 0.009 **C 1.413 2 0.706 38.234 0.025 *误差 0.037 2 0.018总计 439.613 9校正的总计 13.466 8注：**表示极显著水平（p＜0.01）；*表示显著水平（p＜0.05）

图 3-1 250、260、270、280 nm 波长色谱图Fig. 3-1 Chromatograms of 250、260、270、280 nm在选定 250、260、270、280 nm 四个波长及全波长条件下进行全波长扫描，扫描结果如图 3-1 所示，在 250 nm 下，色谱峰较多且响应值高。故选择 250 nm作为青胡桃指纹图谱测定的检测波长。3.3.2 流动相的选择为了最大程度的分离青胡桃药材谱图中各色谱峰，以甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水作为流动相考察，结果如图 3-2 所示，发现甲醇-0.1%甲酸水作为流动相色谱峰分离度更好，故选择甲醇-0.1%甲酸水作为流动相。

图 3-1 250、260、270、280 nm 波长色谱图Fig. 3-1 Chromatograms of 250、260、270、280 nm在选定 250、260、270、280 nm 四个波长及全波长条件下进行全波长扫描，扫描结果如图 3-1 所示，在 250 nm 下，色谱峰较多且响应值高。故选择 250 nm作为青胡桃指纹图谱测定的检测波长。3.3.2 流动相的选择为了最大程度的分离青胡桃药材谱图中各色谱峰，以甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水作为流动相考察，结果如图 3-2 所示，发现甲醇-0.1%甲酸水作为流动相色谱峰分离度更好，故选择甲醇-0.1%甲酸水作为流动相。
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本文编号：2847644