黄芩素对大鼠肾间质纤维化内质网应激通路干预作用研究

发布时间：2020-10-19 23:42

　　 目的:探索不同剂量黄芩素对单侧输尿管结扎诱导的大鼠肾肾间质纤维化病程的干预作用及其可能的作用机制,并为黄芩素治疗和逆转肾间质纤维化的临床应用提供依据。方法:1.模型建立:选取30只健康的Wistar大鼠,雌雄各15只。适应性喂养1周后,称取体重,随机分为假手术组(n=12)、手术组(n=18)造模。采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型。手术组于术后第3天、7天、10天各取6只处死,假手术组大鼠于对应相同时间节点每次取4只处死。摘取梗阻侧肾脏,行HE染色,观察肾脏病理改变,记录造模成功时间节点;2.药物干预:依据造模结果,选择造模成功时间节点作为药物干预结束时间。选取40健康的Wistar大鼠,雌雄各20只。适应性喂养1周后,随机分为两组,分别为假手术组(n=10)和手术组(n=30)进行造模。造模成功后,将手术组随机分为3组,分别为模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组,每组各10只。黄芩素低剂量组给以2%黄芩素溶液50mg/kg/d,黄芩素高剂量组给以2%黄芩素溶液100mg/kg/d,每日灌胃1次,至造模成功时间节点;模型组和假手术组则每日给予50mg/kg生理盐水灌胃,灌胃时间相同。实验终末记录大鼠体重变化,收集血清,并留取肾脏组织,记录其重量变化,检测血肌酐、尿素氮、β微球蛋白(β2-MG)和视黄醇结合蛋白(RBP4)、肾脏组织病理损伤,肾小管及间质胶原纤维面积变化,免疫组化法检测平滑肌结合蛋白(α-SMA)表达情况,蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白CHOP、caspase-3变化。结果:1.各组大鼠肾脏病理改变随造模时间延长日益加重,术后第3天出现肾小管扩张、肾小管上皮细胞脱落和坏死;第7天出现肾间质组织增多、伴单核细胞浸润;第10天出现较明显肾小管损害和肾间质纤维化改变。提示第10天可作为造模时间节点;2.黄芩素低剂量组、高剂量组与模型组比较大鼠体重增加(P0.01),黄芩素高剂量组与低剂量组比较,体重增加更为明显,两组间比较差异有统计学意义(P0.05);肾脏系数:黄芩素高剂量组与模型组相比肾脏系数降低,差异有统计学意义(P0.01);黄芩素低剂量组、高剂量组尿素氮水平与模型组相比下降,差异有统计学意义(P0.01);黄芩素低剂量组、高剂量组血清β2-MG和RBP4与模型组比较含量减少(P0.05),高剂量组与低剂量组比较,下降更为明显,两组差异有统计学意义(P0.01);HE染色显示:黄芩素低剂量组、高剂量组与模型组比较,肾小管上皮细胞变性、肾间质水肿、炎症细胞浸润减轻;Masson染色显示:与模型组比较,黄芩素低剂量组、高剂量组,胶原纤维沉积面积减少(P0.01);免疫组化显示:黄芩素低剂量组、高剂量组α-SMA阳性表达面积与模型组相比有所减少,差异有统计学意义(P0.01);蛋白免疫印迹显示:黄芩素低剂量组、高剂量组与模型组相比,CHOP、caspase3表达量有下降(P0.01),黄芩素高剂量组与低剂量组比较,CHOP、caspase3表达量下降更为明显,两组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:(1)黄芩素可有效干预输尿管结扎造成的肾小管和间质损伤,保护肾功能;(2)黄芩素可延缓肾间质纤维化进程,这可能与其对内质网应激、细胞凋亡的抑制作用有关。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

造模时间的延长情况而加重。假手术组肾脏颜色暗红有光泽，被膜光滑，纵行剖开后，解剖结构分布如常，模型组肾脏与梗阻侧对比，体积不同程度增大，被膜菲薄，易于撕裂，剥开后有黄色液体流出，气味腥臭，肾实质萎缩变薄。见图1-1。注:图 A 假手术组，图 B 3d 组，图 C 7d 组，图 D 10d 组。各图左侧为梗阻侧肾脏，右侧为正常侧肾脏。图 1-1 肾脏肉眼大体观察病理改变：假手术组肾脏未发生明显病理改变，手术组中 3d 组出现部分肾小管扩张、肾小管上皮细胞脱落和坏死；7d 组肾间质扩张更加明显、伴单核细胞浸润；10d 组出现肾小管排列紊乱、肿胀变形，肾间质扩张，淋巴细胞、单核

注:图 A 假手术组，图 B 3d 组，图 C 7d 组，图 D 10d 组。图 1-2 造模后大鼠肾脏 HE 染色（×400）3.2 药物干预后大鼠一般状况及肾组织大体肉眼观药物干预期间假手术组和治疗组大鼠未发生死亡，模型组死亡 2 只。假手与模型组大鼠一般情况、肾组织大体肉眼观如 3.1 所描述。黄芩素治疗组般状况有所改善，但精神状态一般，反应较迟钝。黄芩素治疗组肾体积较小，其他无明显区别，两治疗组之间一般状况无明显差异。3.3 药物干预后大鼠体重变化及肾脏系数变化大鼠药物干预后体重变化：黄芩素低剂量组、高剂量组、模型组与假手术，体重增加较缓慢，差异有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01），黄芩素组、高剂量组与模型组相比，体重增加较多，差异有统计学意义（P＜0.0素高剂量组与低剂量组相比，体重增加更为明显，差异有统计学意义（；肾脏系数：黄芩素低剂量组、模型组与假手术组相比，肾脏系数提

注:图 A 假手术组，图 B 模型组，图 C 低剂量组，图 D 高剂量组。图 1-3 大鼠肾脏 HE 染色（×400）表 1-4 各组大鼠肾间质纤维化面积（x±ｓ）n 肾间质纤维化面积(%)组 10 0.108±0.016 8 0.291±0.022*组 10 0.192±0.018*#组 10 0.094±0.023#+与假手术组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.01；与低剂量组比较，+P＜0
【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 田锋;张彤;李淑菊;;中药抗肾间质纤维化的研究进展[J];黑龙江中医药;2015年02期

2 曹玉英;;肾间质纤维化的研究进展[J];现代医药卫生;2011年23期

3 夏运成;彭灿辉;屈申;刘伏友;彭佑铭;;尿视黄醇结合蛋白与肾小管间质受损的相关性研究[J];中南大学学报(医学版);2011年10期

4 阮颖新;张鹏宇;林珊;李春媚;刘素雁;;内质网应激相关凋亡途径参与单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化[J];中华肾脏病杂志;2011年05期

5 杨念生,武庆庆,姜宗培,张锐,王芳,罗明乾,关伟明,余学清,叶任高;维甲酸抑制大鼠单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化[J];中华肾脏病杂志;2004年03期

相关博士学位论文 前2条

1 王筝;肾络通对梗阻性肾病大鼠炎性介质表达的影响[D];河北医科大学;2014年

2 王慧娟;IL-17调节TGF-β信号及其在肾间质纤维化中的意义[D];南京医科大学;2013年

本文编号：2847872