黄芪—丹参药对改善高血压肾间质纤维化的临床探讨及实验研究

发布时间：2020-10-20 00:17

　　 目的:通过观察各组SHR(Spontaneous Hypertension Rat)肾间质纤维化的程度,探讨黄芪-丹参药对防治肾间质纤维化病理进程,维持肾脏结构、功能的药效学;通过两药配伍研究其对肾脏结构、促纤维化因子表达及对肾脏内PI3K、AKT的蛋白质和mRNA表达的影响,探究黄芪-丹参配伍改善RIF的作用机制。方法:(1)45只16周龄SHR作为实验组,9只同周龄WKY大鼠作为对照组,饲养至24周龄,使用随机数字表法分组,实验组每组9只,共分为5组:H组(黄芪组)、D组(丹参组)、HD组(黄芪-丹参组)、X组(缬沙坦组)、M组(SHR模型组),对照组为W组(9只WKY)。(2)每组大鼠相应药物灌胃干预(每只2ml/日),持续4周。(3)干预疗程结束后,大鼠麻醉,主动脉取血,ELISA测血清AngⅡ、β2-MG等影响肾间质纤维化标志物的浓度。(4)提取大鼠肾脏标本,行HE染色与透射电镜观察肾脏形态、结构及组织病理变化。(5)免疫组化观察肾脏组织中促纤维化细胞因子表达;(6)RT-PCR测试肾脏内PI3K、AKT的mRNA水平变化,WB测试肾脏内PI3K、AKT的蛋白质水平变化。结果:(1)各用药组较M组相比,大鼠血清β2-MG含量均有降低,差异明显(P0.05),其中以HD组血清指标含量最低,与其他用药组比较有统计学意义(P0.01);与M组对比,其余5组大鼠血清AngⅡ检验结果显著下降(P0.05),其中以HD组效果最为明显,与其他用药组比较有统计学意义(P0.01)。(2)HE示:WKY组肾脏组织形态正常,无明显病理表现,其余各用药组少见肾间质小灶纤维化,发现轻度增生的系膜,每系膜区细胞数量减少,少见炎性浸润,可见少量蛋白管型,以HD组肾脏组织结构及形态最为正常,趋近于WKY组。(3)TEM示:各用药组与M组对比,少量成纤维细胞聚集,细胞形态较正常,炎症浸润减轻,各细胞器较丰富,基底膜基本正常,偶见轻度增厚,其中HD组肾脏组织病理表现最优。(4)IHC示:各组TGF-β1、CTGF受体表达存在明显差异,其中以M组TGF-β1、CTGF阳性表达率最高,HD组及WKY组阳性表达率最低,其余用药组较M组阳性表达率均有不同程度降低。(5)RT-PCR示:M组PI3K、AKT的mRNA表达与其余5组对比明显增多(P0.05),其中以HD组抑制作用最为显著;Western Blotting结果提示其余组别PI3K、AKT的蛋白表达量均较M组明显抑制,以HD组抑制效果最为显著。结论:(1)HD相伍可显著改善SHR大鼠RIF的轻重,药效学比较优于H组、D组、X组;(2)黄芪-丹参药对改善肾间质纤维化的药理机制与其抑制SHR肾脏PI3K、AKT表达,阻断PI3K/AKT通路激活密切相关。
【学位单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1 血清β2 微球蛋白标志物含量鼠血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量发现，模型组与各用药组相比差异均有统计学意义（P＜0及缬沙坦组、WKY 对照组与模型组比较差异具有显著性意义

但黄芪-丹参药对效果好于单味中药，且优于缬沙坦组，详见表 4、图2。表 4 血清 AngⅡ标志物的含量 （X±S）注：*P＜0.05 示与 SHR 模型组比较差异存在显著性，**P＜0.01 表示与 SHR 模型组比较具有极显著性差异，ΔP＜0.01 表示与黄芪-丹参组比较具有极显著性差异。图 2 血清 AngⅡ标志物含量1.4.3 HE 染色WKY 肾小球大小正常，系膜区未见明显增生，肾小管上皮细胞形态正常，无肾小球硬化。SHR 模型组可见肾小球体积增大，系膜区增生，每系膜细胞数量 3～5 个，系膜基质扩大，少量肾小球局灶阶段硬化，球囊黏连，毛细血管管腔扩张充血，肾小管上皮细胞肿胀，空泡变性，可见蛋白管型，肾间质小灶纤维化，炎细胞灶性浸润，间质内小动脉肌层明显增厚。黄芪组、丹参组、缬沙坦组可见肾小球体积稍增大，系膜区可见轻度增生，每系膜细胞数量 2～3 个，系膜基质轻度扩大，个别肾小球从局灶阶段硬化，毛细血管轻度扩张，肾小球上皮细胞轻度肿胀，可见少量蛋白管型，炎细胞灶性浸润；黄芪-丹参组组织较其他用药组肾小球体积较正常，系膜区增生较轻，每系膜细胞数量 1～2 个

1.4.4 透射电镜观察肾脏组织如图 4 所示，WKY 组细胞质丰富，细胞结构正常，基底膜结构正常，足突排列规则，无小管间质纤维化表现，无炎症浸润；M 组细胞结构、形态不规则，可见明显的足突融合，细胞质明显减少，足突宽大，肾间质明显水肿和细胞数增多，
【参考文献】

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本文编号：2847914