火麻仁提取液对D-半乳糖致衰老大鼠神经炎症反应的影响及其机制研究

发布时间：2020-10-21 15:59

　　 目的:随着社会老龄化问题日益突出,神经退行性疾病严重影响老年人的生活质量,如何延缓衰老、改善脑老化而保护脑功能显得至关重要。研究表明火麻仁具有良好的抗炎抗衰老作用,但具体机制尚不清楚。通过火麻仁提取液(Extract of Fructus Cannabis,EFC)干预D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的衰老大鼠模型,评估EFC对衰老大鼠空间学习和记忆能力的影响,同时检测与神经炎症相关的基因与蛋白的表达,进而探讨EFC减轻中枢神经系统炎症反应、改善认知功能可能存在的分子机制,为火麻仁的应用提供理论及实验依据。方法:1.将80只健康雄性SD大鼠(250-300 g,3月龄)随机分成8组。(1)空白对照组(Control),前3个月腹腔注射生理盐水,后3个月生理盐水灌胃,每天一次;(2)衰老模型组(D-gal),400 mg/kg D-gal连续腹腔注射3个月,后3个月生理盐水灌胃,每天一次;(3)低、中、高剂量EFC预防组(给药剂量以生药量换算),在D-gal造模前分别预防性给予400mg/kg、800 mg/kg和1600 mg/kg EFC灌胃3个月后再给予400 mg/kg D-gal腹腔注射3个月;(4)低、中、高剂量EFC治疗组,先给予400 mg/kg D-gal腹腔注射3个月造模后再分别给予400 mg/kg、800 mg/kg和1600 mg/kg EFC灌胃3个月。2.Morris水迷宫试验评估大鼠的空间学习记忆能力。3.酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠脑海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平。4.定量反转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)测定大鼠脑海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因的mRNA表达。5.免疫荧光法测定大鼠脑海马齿状回GFAP的表达。6.免疫印迹法(western blot,WB)检测GFAP、IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平。7.免疫组织化学检测大鼠脑海马齿状回p-p65的表达。结果:1.水迷宫测试结果显示,与Control组相比,D-gal组在定向航行阶段第5天逃避潜伏期显著延长(P0.05),在空间探索测试中穿越平台次数显著减少(P0.05);400 mg/kg与800 mg/kg EFC预防组和治疗组与D-gal组相比,逃避潜伏期显著缩短(P0.05),穿越平台次数显著增加(P0.05)。2.与Control组相比,D-gal组大鼠海马组织的TNF-α与IL-1β水平明显增高(P0.05);400 mg/kg、800 mg/kg EFC预防组和治疗组TNF-α、IL-1β水平较D-gal组明显降低(P0.05);1600 mg/kg EFC治疗组TNF-α及IL-1β水平与D-gal组相比均没有显著差异;1600 mg/kg的EFC预防组TNF-α水平与较D-gal组相比没有显著差异,但IL-1β水平较D-gal组明显降低(P0.05)。3.D-gal组GFAP mRNA水平明显高于Control组(P0.05);与D-gal组相比,各剂量EFC预防组与400 mg/kg、800 mg/kg EFC治疗组的GFAP mRNA水平明显降低(P0.05),而1600 mg/kg EFC治疗组则没有显著差异。4.D-gal组GFAP荧光密度明显高于Control组(P0.05);与D-gal组相比,各剂量EFC预防组与400 mg/kg、800 mg/kg EFC治疗组的GFAP荧光密度明显降低(P0.05),而1600 mg/kg EFC治疗组则没有显著差异。5.免疫印迹结果显示IKK、IκB、p65总蛋白在各组间表达量没有显著差异;与Control组相比,D-gal组的GFAP、p-IKK、p-IκB与p-p65蛋白表达水平均明显升高(P0.05);与D-gal组相比,各剂量EFC预防组与400mg/kg、800 mg/kg EFC治疗组的GFAP、p-IKK、p-IκB与p-p65蛋白表达水平均明显降低(P0.05),而1600 mg/kg EFC治疗组则没有显著差异。6.免疫组织化学测定p-p65蛋白的结果显示,EFC可以有效减弱海马区由D-gal诱导的p-p65胞核内表达水平。结论:1.EFC能在一定程度上改善衰老大鼠的空间学习及记忆能力。2.EFC可能通过抑制星形胶质细胞的活化并减少大脑海马炎症因子TNF-α与IL-1β的表达水平而发挥抗炎作用。3.EFC可能通过抑制NF-κB信号通路的激活来减轻神经炎症反应进而改善D-gal诱导的衰老大鼠学习和记忆障碍。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
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本文编号：2850326