基于NF-κB信号通路研究小青龙汤对肺癌H292细胞分泌MUC5AC的调控机制

发布时间：2020-10-22 13:56

　　 目的:通过体外实验研究小青龙汤对肺癌H292细胞活性及分泌MUC5AC的影响,探讨小青龙汤作用的分子机制并为其临床应用提供理论依据。方法:采用MTT法检测不同剂量小青龙汤(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)对人肺癌H292细胞活性的抑制作用;倒置显微镜观察不同剂量小青龙汤对H292细胞产生的形态学影响;ELISA法检测IL-1β诱导的H292细胞MUC5AC分泌情况,根据结果建立体外炎症模型,并检测不同剂量小青龙汤(1000μg/mL、500μg/mL)对炎症模型细胞分泌MUC5AC、IL-8、TNF-α的影响;Western Blot法检测小青龙汤对炎症模型细胞NF-κB信号通路IκB、P65蛋白表达的影响。结果:1 MTT法检测结果显示,与空白对照组相比,不同剂量小青龙汤(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292细胞24h、48h后,OD值均有降低(P0.01)。随着给药浓度的增加,细胞抑制率增加,在同一时间里细胞抑制率有剂量依赖性。2不同浓度小青龙汤(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292细胞24h、48h后,在倒置显微镜下可以观察到H292细胞发生了不同程度的变小、变圆,细胞间隙增大,细胞碎片增多等改变,1000μg/mL浓度组的改变最为明显。3 ELISA结果显示使用IL-1β作为刺激剂,当IL-1β浓度为5ng/mL,作用时间为24h时,H292细胞分泌到胞外的MUC5AC含量与对照组相比有差异(P0.05),并且此时由细胞分泌到胞外的MUC5AC含量占细胞总产生量(胞内+胞外)的百分比最高,可作为炎症模型用于后续实验。在检测细胞上清MUC5AC、IL-8、TNF-α的表达中,与模型组相比,抑制剂组、小青龙汤高剂量组(1000μg/mL)和小青龙汤低剂量组(500μg/mL)均有降低(P0.05)。4 Western Blot结果显示,与空白对照组比较,模型组H292细胞中NF-κB通路相关蛋白IκB的表达水平下降,P65的表达升高(P0.05)。与模型组相比,抑制剂组、小青龙汤高剂量组(1000μg/mL)和小青龙汤低剂量组(500μg/mL)细胞中蛋白IκB的表达均有不同程度的升高(P0.05);P65的蛋白表达有不同程度的降低(P0.05)。结论:1小青龙汤可以抑制肺癌H292细胞活性,并具有剂量依赖性。2小青龙汤可以降低炎症状态下肺癌H292细胞分泌的MUC5AC表达,同时减少炎症细胞因子IL-8、TNF-α的释放,减轻炎症反应。3小青龙汤调控MUC5AC表达及炎症细胞因子IL-8、TNF-α分泌与NF-κB信号通路相关。
【学位单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

controlmodelAB C050100150200**#*##*图 7.各 药 物组 对 H292 细 胞 分 泌 TNF-α含 量 的影 响 制 剂组 ； B.小 青 龙汤 高 剂 量 组； C.小 青 龙汤 低 剂 IL-1β诱导的 H292 细胞 IκB、P65 蛋白表达 结果见图 8。mL/mL
【参考文献】

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本文编号：2851685