补肾活血法对卵巢早衰和控制性超促排卵着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

发布时间：2020-10-23 20:24

　　 第一部分补肾活血方对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制研究目的探讨补肾活血方对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠卵巢颗粒细胞的影响及作用机制。方法采用环磷酰胺(CTX)腹腔注射建立卵巢早衰小鼠模型。将40只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为4组:正常组(NC)、环磷酰胺诱导的卵巢早衰模型组(CTX)、补肾活血方组(BHR)、脱氢表雄酮组(DHEA)。各组小鼠于造模前一周开始给予相对应药物预防性灌胃治疗,造模成功后继续治疗二周。观察各组小鼠造模前后体重、卵巢指数,采用放射性免疫分析方法(RIA)检测各组小鼠血清雌激素和孕激素水平,HE染色法检测卵巢组织病理学改变并行闭锁卵泡计数,TUNEL法检测卵巢组织颗粒细胞凋亡水平,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测小鼠卵巢组织凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平。结果与NC组相比,CTX组小鼠体重、卵巢指数、雌孕激素水平均下降,闭锁卵泡数增加,卵巢颗粒细胞凋亡增加。经补肾活血方治疗后,上述指标均有不同程度改善。卵巢组织中促凋亡蛋白Bax、凋亡终末剪切酶Caspase-3的mRNA和蛋白表达下调,抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2/Bax的蛋白表达水平比率增加。结论补肾活血方可保护和治疗环磷酰胺诱导的卵巢早衰,改善卵巢储备功能,其机制可能与抑制卵巢颗粒细胞凋亡,上调抗凋亡因子Bcl-2表达,下调促凋亡因子Bax、凋亡终末剪切酶Caspase-3表达有关。第二部分补肾安胎方对控制性超促排卵着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及作用机制研究目的探讨补肾安胎方对控制性超促排卵着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用腹腔注射7.5 IU PMSG,48h后腹腔注射7.5 IU HCG建立控制性超促排卵着床障碍小鼠模型,注射HCG后将雌性小鼠与雄性小鼠以2:1比例合笼,正常组雌鼠于相应时间点给予等容积生理盐水腹腔注射并合笼。于次日8:00am观察雌鼠阴道发现阴栓者记为妊娠第1天。将50只成功妊娠的雌性昆明小鼠随机分为5组:正常妊娠组(NC)、控制性超促排卵致妊娠模型组(COH)、补肾安胎方低剂量组(LOW)、补肾安胎方中剂量组(MID)、补肾安胎方高剂量组(HIGH)。于妊娠第1天起给予相应治疗5天。采用RIA法检测小鼠血清雌、孕激素水平,TEM法检测卵巢组织超微结构改变,HE法检测卵巢组织病理学改变并行闭锁卵泡和妊娠黄体计数,TUNEL观察卵巢组织颗粒细胞凋亡水平,Western blotting方法检测小鼠卵巢组织凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3 的蛋白表达水平。结果COH着床障碍模型小鼠卵巢湿重、雌激素水平、孕激素水平、闭锁卵泡数、妊娠黄体数增加,卵巢颗粒细胞凋亡增加。卵巢组织超微结构显示COH着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞核染色质增多,凝聚,边集,或呈新月状边集于核膜上,卵巢组织表现为灶性空泡化,凋亡后期颗粒细胞内可见典型的凋亡小体。经不同剂量补肾安胎方治疗后,TEM观察颗粒细胞凋亡所特有的超微结构变化明显改善,甚至消失,可见正常颗粒细胞核仁,线粒体增多,嵴增多,空泡明显减少,脂滴圆形或椭圆形。经补肾安胎方治疗后,卵巢组织中促凋亡蛋白Bax、凋亡终末剪切酶Cleaved-Caspase-3蛋白表达下调,抗凋亡蛋白 Bcl-2蛋白表达上调。结论补肾安胎方可能通过上调抗凋亡因子Bcl-2,下调促凋亡因子Bax和凋亡终末剪切酶Cleaved-caspase-3 凋亡信号通路的表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,从而有助于COH着床障碍模型小鼠黄体的形成与维持,改善小鼠着床障碍,减少胚胎丢失,提高孕育成功率。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5;R-332
【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 补肾活血方对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制研究
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 补肾安胎方对控制性超促排卵着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及作用机制研究
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢

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