丹皮酚通过内质网应激和线粒体损伤途径促进卵巢癌细胞凋亡

发布时间：2020-10-23 22:29

　　 【目的】探讨丹皮酚对卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。【方法】用不同剂量(0、1、2、3、4、5、6、7、8 mmol/L)丹皮酚处理人正常卵巢表面上皮细胞HOSEpiC和人类卵巢癌细胞SKOV3。应用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定丹皮酚对HOSEpiC和SKOV3细胞的毒副作用,选择低剂量丹皮酚(1、2、5 mmol/L)进行后续实验。用丹皮酚(1、2、5 mmol/L)处理SKOV3细胞,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法观察SKOV3细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测SKOV3细胞Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax、葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源(CHOP)、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、细胞色素c(Cyto-c)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素c氧化酶4(COX IV)、cleaved Caspase-9的表达,流式细胞术检测细胞SKOV3凋亡和Ca2+水平。【结果】丹皮酚(2、5 mmol/L)对正常细胞无害,可剂量依赖性地降低SKOV3细胞存活率。丹皮酚(2、5 mmol/L)抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。与空白对照组比较,丹皮酚(2、5 mmol/L)均升高内质网应激相关的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表达水平及Ca~(2+)含量(均P 0.05)。与空白对照组比较,丹皮酚2、5 mmol/L均降低线粒体损伤相关的凋亡通路Cyto-c、AIF(线粒体内)水平,升高Cyto-c、AIF(胞质)的表达水平,升高cleaved Caspase-9表达水平,下调Bcl-2及上调Bax表达水平(均P 0.05),且呈剂量依赖性。【结论】丹皮酚剂量依赖性地调控SKOV3细胞中内质网应激和线粒体损伤相关的凋亡通路蛋白,可促进卵巢癌细胞凋亡。
【部分图文】：

图1结果显示：高剂量（6～8 mmol/L）丹皮酚处理后，HOSEpi C细胞存活率剂量依赖性地下降（P<0.05）。低剂量（2～5 mmol/L）丹皮酚处理后，SKOV3细胞存活率剂量依赖性地下降（P<0.05）。表明丹皮酚2～5 mmol/L对正常细胞无毒性，且剂量依赖性地抑制SKOV3细胞的存活，因此选择丹皮酚1～5 mmol/L进行后续实验。2.2 丹皮酚抑制SKOV3细胞增殖

本研究进一步观察丹皮酚促进SKOV3细胞凋亡潜在的分子机制。Western Blot法检测内质网应激相关的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表达的结果显示：与空白对照组比较，丹皮酚1、2、5 mmol/L均升高GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3的蛋白表达水平（P<0.05），其中丹皮酚2、5 mmol/L的升高效果有统计学意义（P<0.05），且呈剂量依赖性。进一步用流式细胞术检测细胞内Ca2+含量，结果显示：与空白对照组比较，丹皮酚1、2、5 mmol/L均升高Ca2+含量（P<0.05），其中丹皮酚2、5 mmol/L的升高效果有统计学意义（P<0.05），且呈剂量依赖性。具体结果见图4。表明丹皮酚可通过促进Ca2+从内质网释放到细胞质中激活内质网应激相关的凋亡通路，促进SKOV3细胞凋亡。图3 丹皮酚促进SKOV3细胞凋亡

丹皮酚促进SKOV3细胞凋亡
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