蜜环菌多糖通过抗凋亡和抗氧化对阿尔茨海默症药理作用的研究

发布时间：2020-10-24 00:24

　　 神经系统退行性疾病的病灶以及发病机制都较为复杂,且对机体损害较大,对老年人身体和心灵的健康造成严重的威胁。由突触的变性以及神经元的丢失所引起的阿尔茨海默症(Alzheimer's disease;AD)又被称作老年痴呆病,是中枢神经系统退行性疾病之一,其发病机制不明,治疗药物有限。该疾病的临床特点是学习及记忆能力受损,以及认知功能缺陷。AD在全球范围内的发病率呈逐年上升的趋势并且还没有良好治愈的方法,亟待研发高效、低毒的AD防治药物。真菌被用作功能性食品,表现出多种药理活性,副作用少,常作为药物使用。蜜环菌(Armillaria mellea)又称榛蘑,是一种药食两用真菌,已经在东亚地区使用了数百年。用于传统医学的蜜环菌,具有很多药理作用,包括延缓衰老,催眠镇静,提高机体免疫力等。多糖作为蜜环菌的主要成分,具有清除超氧化物自由基的能力,表现出抗氧化性质。然而,蜜环菌对阿尔茨海默症的影响尚未得到系统报道。本文主要从抗氧化和抗凋亡途径研究蜜环菌多糖对阿尔茨海默症的治疗效果及初步机制。本研究包括以下几部分:1.蜜环菌胞内粗多糖的制备本研究通过热水浸提法,sevag法,透析,分级醇沉等步骤得到一系列不同乙醇浓度醇沉的粗多糖,命名为AMPSa~e,得率分别为0.93%,1.30%,1.93%,1.60%,1.00%。采用70%乙醇沉淀获得的蜜环菌多糖(AMPSc)在L-谷氨酸(L-Glu)诱导的HT22细胞凋亡模型和AlCl_3加D-半乳糖(D-gal)诱导的AD小鼠模型中考察其对阿尔茨海默症的治疗作用。2.蜜环菌多糖体外抗阿尔茨海默症活性及机制的研究MTT法测定L-Glu诱导的HT22细胞凋亡模型中细胞存活率,DCFH-DA荧光染色法检测HT22细胞内活性氧(ROS)的累积,通过流式细胞术检测HT22细胞内线粒体膜电位(MMP)的改变以及细胞凋亡比例,并通过试剂盒检测分析HT22细胞内caspase-3的活性。结果表明,AMPSc显著改善细胞活力,抵抗细胞凋亡,抑制细胞内活性氧的积累,阻止caspase-3的活化和恢复MMP。3.蜜环菌多糖体内抗阿尔茨海默症活性及机制的研究在AlCl_3加D-gal诱导的AD小鼠模型中,经过8周建模和4周给药治疗,进行行为学测试和生理生化指标测定。结果表明,AMPSc增强了自主活动测试中的水平运动,在旋转棒测试中改善了耐力时间,并减少了水迷宫测试中的逃避潜伏时间。在4周AMPSc给药治疗后,从血清和下丘脑中胆碱乙酰转移酶(ChAT)含量的增加和乙酰胆碱(Ach)浓度的升高以及乙酰胆碱酯酶(AchE)水平的下降可以看出AD小鼠的中枢胆碱能系统功能得到改善。此外,AMPSc不仅可以提高AD小鼠血清及下丘脑中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,而且还抑制了AD小鼠下丘脑中ROS的水平升高,从而改善了AD小鼠体内氧化应激状态。最后,AMPSc降低AD小鼠海马神经的凋亡,β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积,氧化损伤和p-Tau蛋白聚集。综上所述,体内及体外实验均从抗氧化和抗凋亡途径证明了蜜环菌多糖抗阿尔茨海默症的活性,本研究为蜜环菌多糖作为治疗或预防神经退行性疾病的神经保护候选物提供了药理学证据。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 2.1 蜜环菌多糖的制备Figure 2.1 The preparation of Armillaria mellea crude polysaccharides.结果与讨论 胞内多糖的提取通过热水浸提法对蜜环菌菌丝体中的胞内多糖进行提取，采用 Sevag 试剂分级醇沉等方法，得到蜜环菌胞内粗多糖（AMPS）。AMPS 为棕黄色粉末回收率为 0.76%。 分级醇沉多糖得率表 1.1 不同浓度乙醇醇沉蜜环菌多糖得率e 1.1 Effect of different ratios of ethanol on the polysaccharides yield from Armea mycelium

软件对数据进行处理，数据以 x±S.D.表示，性，随后进行多重比较（Dunn's test）。当胞活力沉的蜜环菌多糖对 L-谷氨酸诱导损伤 HT 法检测 AMPSa-e 对 HT22 细胞的存活率。时，细胞存活率达 50 %（P < 0.001；图 3.L 的 AMPSb 和 AMPSc 预处理 3 h 后，HT< 0.05），而 AMPSa，d 和 e 没有影响，因续体内外实验的研究。

第 3 章 蜜环菌多糖体外抗阿尔茨海默症活性及机制的研胞活力Sc 对 25 mM 的 L-谷氨酸诱导损伤 HT22 细测 AMPSc 对 HT22 细胞的存活率。结果表用 40 或 80 μg/mL 的 AMPSc 预处理 3 小时 13.7％（P < 0.05；图 3.2）。
【参考文献】

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本文编号：2853750