姜黄素对大鼠脊髓损伤后免疫细胞调节作用研究

发布时间：2020-10-24 13:47

　　 目的:通过对脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)大鼠模型进行姜黄素(Curcumin,Cur)干预,观察姜黄素对SCI后大鼠模型的运动功能、痛觉功能的变化,以及脊髓组织学结构的影响,并对脾脏中T细胞、NK细胞、外周血中性粒细胞和巨噬细胞进行检测,初步明确姜黄素对SCI后大鼠免疫细胞的调节作用。方法:应用Allen’s法制备大鼠SCI模型。本研究将45只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、姜黄素组(Cur),每组各15只。Cur组术后3天内腹腔注射姜黄素溶液,给药浓度为100 mg/kg,Sham组和Model组分别注射生理盐水。7d、14d及21d后分别进行BBB评分(运动功能评价)、热痛觉分析、机械痛觉分析和脊髓组织形态学观察。并同步于7d、14d和21d在三组大鼠中各取3只大鼠行脊髓和脾脏取材。流式细胞术分别观察7d、14d及21d大鼠脾脏组织中辅助T淋巴细胞、杀伤T淋巴细胞和NK细胞的数量变化,外周血中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。免疫荧光染色分别观察7d、14d及21d大鼠脊髓组织中巨噬细胞M1型和M2型表达量变化,从而探讨姜黄素对SCI后大鼠的免疫细胞作用。结果:(1)SCI后大鼠后肢出现瘫痪现象,7d后BBB分值最低,14d后BBB评分逐渐上升,到21d Cur组BBB评分后肢功能有明显恢复,与Model组相比有显著性差异(P0.05)。(2)SCI后7d,Cur组比Model组热痛觉反应时间延长,与Model组相比有显著性差异(P0.05)。在术后14d及21d,Model组与Cur组比较,Model组大鼠对热刺激的反应时间明显缩短,腹腔注射Cur后承受能力变强,由此可知,Cur可提高大鼠SCI后造成的对热刺激痛的承受能力。(3)大鼠SCI后7d,Cur组对机械刺痛的承受力度明显增强。SCI第14d及21d,Cur组与Model组相比,承受机械痛能力显著增强,表明Cur可显著改善SCI后机械刺激痛的承受能力。(4)在SCI后7d,Model组脊髓组织失去典型形态,出现局灶性坏死空洞现象,各时间点Cur组和Model组相比,炎性浸润和空泡坏死情况都明显减轻。(5)SCI后7d,Cur组外周血中性粒细胞、巨噬细胞和脾脏中杀伤T淋巴细胞比例均显著降低;在损伤后14d和21d,Cur组中性粒细胞较Model组均显著降低。(6)免疫荧光结果显示SCI损伤处7d、14d和21d Cur组比Mode组iNOS的表达量均显著降低,CD206表达量均显著升高。结论:(1)姜黄素能有效提高SCI后大鼠的BBB得分,提高痛觉阈值并促进受损组织的修复。(2)姜黄素可能通过降低SCI后体内免疫器官中中性粒细胞、巨噬细胞和杀伤性T淋巴细胞的比例,在脊髓损伤部位减少M1型巨噬细胞数量增加M2型巨噬细胞,从而降低SCI后的反应性炎症,进而提高SCI后的疼痛耐受性。
【学位单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
引言
第一章 大鼠SCI模型行为学分析和脊髓HE染色观察
    实验材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 姜黄素配制
        1.3 实验仪器与试剂
        1.4 技术路线图
        1.5 实验分组
        1.6 大鼠脊髓损伤模型建立
        1.7 大鼠BBB评分
        1.8 大鼠热痛觉检测
        1.9 大鼠机械痛觉测定
        1.10 脊髓组织切片HE染色
        1.11 数据处理
    第一章实验结果
        2.1 大鼠脊髓损伤后行为学观察
        2.2 大鼠行为学评价-BBB评分
        2.3 大鼠热痛觉测试结果
        2.4 大鼠机械痛测试结果
        2.5 大鼠脊髓切片HE染色结果
第二章 姜黄素对大鼠脊髓损伤后免疫细胞的影响
    实验材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 手术器械
        1.3 实验试剂与仪器
        1.4 技术线路图
        1.5 大鼠脊髓损伤模型建立
        1.6 流式细胞术检测
        1.7 免疫荧光观察
        1.8 数据处理
    第二章实验结果
        2.1 五种免疫细胞流式细胞术检测
            2.1.1 五种免疫细胞在姜黄素处理 7d后的变化
            2.1.2 五种免疫细胞在姜黄素处理 14d后的变化
            2.1.3 五种免疫细胞在姜黄素处理 21d后的变化
        2.2 大鼠脊髓免疫荧光检测
            2.2.1 姜黄素处理 7d后CD206和i NOS的变化
            2.2.2 姜黄素处理 14d后CD206和i NOS的变化
            2.2.3 姜黄素处理 21d后CD206和i NOS的变化
分析与讨论
结论
展望
文章创新性
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间研究成果

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本文编号：2854547