目的:研究西洋参丹参配伍干预血栓形成的作用机制及物质基础。方法:1网络药理学研究通过网络药理学方法,借助TCMSP、TTD、DrugBank、UniProt数据库建立分析文件,利用Cytoscape软件包进行数据分析与网络构建,以Omicshare平台的高级气泡图展示西洋参丹参防治血栓性疾病的药效物质基础和靶点的关系。2 有效部位制备采用加热回流法提取法、大孔树脂层析分离纯化法和真空干燥、冷冻干燥法制备人参皂苷、丹参酮和丹参酚酸三个有效部位,通过高效液相色谱法测定各有效部位中主要成分含量。3 动物实验选取健康雄性SD大鼠70只,随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、阳性对照组(ASA)、西洋参丹参(1:3)水煎剂1组(PSD-1)、西洋参丹参(1:3)水煎剂2组(PSD-2)、西洋参丹参有效部位1组(PSE-1)、西洋参丹参有效部位2组(PSE-2)各10只。假手术组、模型组给0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC),阳性对照组给阿司匹林,PSD-1、PSD-2组给西洋参丹参1:3配伍的水煎剂,PSE-1、PSE-2组给人参皂苷、丹参酮、丹参酚酸提取物,其给药量依照生药材1:3 比例折算,灌胃给药,每日一次,连续给药7天。30%FeC13滤纸贴敷大鼠颈动脉诱导血栓形成进行造模。采用比浊法测定ADP诱导的血小板聚集率,并计算血小板聚集抑制率。通过ELISA法测定血浆TXB2、PGI2、GPIIb/IIIa、P-sel、TG-β、TNFα、CRP水平,并通过HE染色观察动脉血栓状态。结果:1 西洋参丹参抗血栓形成的网络药理学研究结果如下:西洋参丹参中34个活性成分可作用于血栓性疾病相关的11个靶点,涉及10条信号通路。有16个活性成分可作用于Platelet activation(血小板活化)通路中3个靶点,分别是MAPK14,PRKACA编码的PKAC-alpha,ITGB3编码的GPIIIa,16个活性成分多为丹参酮类,其中丹参酮IIA可以同时作用于靶点MAPK14和PRKACA,隐丹参酮可作用于MAPK14和ITGB3,β-谷甾醇亦可同时作用于靶点MAPK14和PRKACA。2 西洋参丹参有效部位制备结果如下:(1)药材检测:所购西洋参药材中人参皂苷Rb1、Rg1、Re含量分别为0.09%、1.18%、3.47%,共计为4.74%;丹参药材中隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA含量分别为0.12%、0.13%、0.10%,共计0.36%,丹参酚酸B含量为3.81%,以上所测含量均符合药典规定。(2)有效部位中主要成分含量:人参皂苷提取物中测得主要成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1 含量分别为 3.56%、15.07%、42.64%,共计 61.27%;丹参酮提取物中测得主要成分二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA含量分别为2.50%、12.52%、13.90%、10.61%,共计39.52%。丹参酚酸提取物中丹参酚酸B含量因测定样品溶液溶解度不同未准确测定,但在实验测定条件下,含量为15%左右。3 西洋参丹参有效部位对大鼠颈动脉血栓的干预实验研究结果如下:(1)血小板聚集情况:Model组血小板聚集率较Sham组增大,具有显著性差异(P0.05);ASA组、PSD-1组和PSE-]组较Model组均有所降低,且差异具有显著性(P0.05),血小板聚集抑制率分别为36.53%、25.26%、19.18%;PSD-2组、PSE-2组较Model组亦有降低,但未见显著性差异(P0.05),血小板聚集抑制率分别为5.05%、16.55%;PSD-1与PSE-1相比、PSD-2与PSE-2相比两组血小板聚集率均无显著性差异。(2)血浆 TXB2、6-K-PGF1α 含量及 TXB2/6-K-PGF1α 比值:与 Sham 组比较,Model组血浆TXB2水平显著升高,存在极显著差异(P0.01),TXB2/6-K-PGF1α比值升高,出现显著性差异(P0.05),血浆6-K-PGF1α水平降低,但无显著性差异;与Model组比较,PSD-1、PSE-1、PSD-2组血浆TXB2水平降低,存在显著性差异(P0.05),ASA和PSE-2组血浆TXB2水平、二者比值显著降低,存在极显著性差异(P0.01);各组较Model组血浆6-K-PGF1α水平无显著性变化;PSD-1、PSE-1两组血浆TXB2、6-K-PGF1α水平、二者比值均无显著性差异;PSE-2组血浆6-K-PGF1α较PSD-2组显著升高,存在显著性差异(P005)。(3)血浆GPIIb/IIIa含量:Model大鼠血浆GPIIb/IIIa含量较Sham组增多,差异具有显著性(P0.01),ASA组、PSD-1组、PSE-1组、PSD-2组和PSE-2组较Model组均降低,差异具有显著性(P0.05);PSD-1与PSE-1相比、PSD-2与PSE-2相比两组血浆GPIIb/IIa水平均无显著性差异。(4)血浆 P-sel、β-TG 含量:与 Sham 组相比,Model 组血浆 β-TG、P-sel水平显著升高,具有极显著性差异(P0.01);与Model组比,ASA和PSE-1组血浆β-TG、P-sel水平降低,具有极显著性差异(P0.01),PSD-2、PSE-2组P-sel水平明显降低(P0.05),β-TG水平降低,但未见显著性差异(P0.05),PSD-1组血浆P-TG、P-sel水平降低,P-TG降低存在显著性差异(P0.05);PSD-1与PSE-1相比、PSD-2与PSE-2相比两组血浆P-sel、β-TG水平均无显著性差异。(5)血浆TNFoα CRP含量:与Sham组相比,Model组血浆CRP、TNF-a水平升高,差异具有显著性(P0.05);与Model组相比ASA组、PSD-1组、PSE-1组、PSD-2组和PSE-2组血浆TNF-α均水平降低,且ASA组和PSE-1组差异具有极显著性(P0.01),PSD-1组、PSD-2组和PSE-2组差异具有显著性(P0.05);与Model组相比PSD-1组、PSE-1组、PSD-2组和PSE-2组血浆CRP水平降低,差异具有显著性(P0.05);PSD-1与PSE-1相比、PSD-2与PSE-2相比两组血浆CRP、TNF-α水平均无显著性差异。(6)组织形态学改变:肉眼观察可见正常大鼠颈动脉血管弹性良好,色泽红润;模型大鼠颈动脉血管脆性增加,颜色暗红,可见血栓形成。光镜下Sham组各层分界明显,为正常动脉血管结构,由内而外可见内皮细胞完整,连续分布;弹性膜呈波浪状,管腔内未见其他异常内容物。Model组镜下可见管腔内血栓形成,以血小板成分为主,可看到较多红细胞,血栓内可见白细胞浸润,以中性粒细胞为主,内皮细胞走向紊乱,连续性被破坏,出现不同程度的分离和剥脱现象,内皮下胶原暴露,弹性膜出现不同程度的僵硬拉直现象。镜下可见给药各组血栓出现一定程度溶解,弹性膜僵直度降低。结论:西洋参丹参配伍具有抗血栓作用,其中人参皂苷、丹参酮、丹参酚酸部位可能是抗血栓的药效物质基础,能通过抗血小板活化、抗炎共同发挥作用。
【学位单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
图１．１丹参西洋参“成分－靶点网络”??（注：蓝色矩形代表靶点；菱形代表成分，绿色为西洋参活性成分，红色为丹参活性成分
图１．２疾病靶点蛋白－蛋白相互作用网络??（注：粉色为一级靶点蛋白，蓝色为二级靶点蛋白，黄色为度值较高的核心靶点蛋白）??
图１．３疾病核心靶点网络??３药物活性成分－疾病靶点网络构建??“”
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本文编号：
2855759
