基于丹参酮类化合物生源途径的丹参质量标志物研究思路探讨

发布时间：2020-10-26 01:04

　　 该研究基于中药质量标志物(Q-marker)理论以丹参为研究对象,对丹参毛状根进行诱导实验,采用实时荧光定量PCR检测毛状根中SmCPS,SmKSL,CYP76AH1 3条基因的相对表达量;分别采用UPLC和GC-MS技术检测毛状根与药材中丹参酮Ⅱ_A、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、1,2-二氢丹参酮、铁锈醇以及次丹参酮二烯的含量;统计学分析表明:丹参毛状根中次丹参酮二烯与铁锈醇的含量与下游丹参酮类化合物的含量存在正相关,且丹参酮类化合物生源途径上重要基因的相对表达量可在一定程度上反映丹参酮类化合物的含量;在多省份丹参药材中,初步发现铁锈醇与丹参酮类化合物的含量也存在正相关。该研究从丹参毛状根体系可控实验入手,结合丹参药材,以丹参中特有指标性成分丹参酮类化合物的生源途径为研究基础,突出了生源途径上游基因、中游中间体化合物与下游丹参酮类化合物含量之间的重要关系,进而为从生源途径方面理解和研究丹参质量标志物(Q-marker)提供了可能的研究思路,以期建立多元、完整的中药丹参的质量控制体系。
【部分图文】：

丹参酮类化合物是由所有二萜的共同前体GGPP(牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸)经过多步生物合成反应生成。已知丹参酮类化合物生源途径见图1,次丹参酮二烯(miltiradiene)是形成丹参酮类化合物骨架的第一步,铁锈醇(ferruginol)是第一个CYP450酶修饰生成的化合物,故这2个化合物为丹参酮类化合物生物合成途径上的重要中间体化合物[12-16]。本研究基于中药质量标志物(Q-marker)理论,结合药材质量的可控性与溯源性,从丹参中特有活性成分丹参酮类化合物的生源途径出发,探究丹参酮类化合物含量与其上游基因表达量、中间体化合物(铁锈醇,次丹参酮二烯)含量的潜在关系,从而以新的思路探究中药丹参的质量控制体系,为完善多元化丹参质量标志物体系提供新的的研究思路。

根据实时荧光定量PCR原始检测结果,按照2-ΔΔCt相对定量计算公式,以诱导0 h的毛状根为对照,计算各样品目的基因相对定量结果,见图2。采用SPSS 21软件进行统计学分析,使用LSD-t检验验证诱导前后基因表达量的显著性差异,默认α=0.05,以P<0.05为差异具有统计学意义。诱导子可以提高以上3种基因的表达量,且在诱导24 h时表达量到达峰值。

分析丹参毛状根诱导组次丹参酮二烯、铁锈醇与总丹参酮含量和非诱导组次丹参酮二烯、铁锈醇与总丹参酮含量,均具有正态性,故采用Pearson 相关性分析。诱导组总丹参酮含量与铁锈醇含量相关系数为0.830(P<0.01);非诱导组总丹参酮含量与中间体铁锈醇含量相关系数为0.577(P<0.01)。诱导组总丹参酮含量与次丹参酮二烯含量相关系数为0.509(P<0.01);非诱导组总丹参酮含量与次丹参酮二烯含量相关系数为0.543(P<0.01)。图4 各省份铁锈醇与丹参酮含量(n=3)
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本文编号：2856247