秦岭地区北柴胡遗传多样性及其质量评价研究

发布时间：2020-10-26 01:25

　　 目的:对秦岭地区的北柴胡样品进行遗传多样性分析,建立北柴胡药材质量评价方法,筛选出秦岭地区优质北柴胡产地。方法:使用CTAB法提取北柴胡样品基因组总DNA,采用通用引物mat K,进行PCR扩增,对PCR产物进行测序,对不同产地北柴胡的遗传多样性进行分析;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,检测波长210 nm,柱温30℃,体积流速0.2 m L?min-1,测定不同产地样品柴胡皂苷类成分的含量,分析不同产地北柴胡样品皂苷含量的差异性及变化趋势;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长210 nm,柱温30℃,体积流速0.2m L?min-1,建立不同产地北柴胡醇溶性指纹图谱,采用SPSS 23.0及SIMCA 14.1软件对样品数据进行聚类分析及主成分分析;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30℃,体积流速0.2 m L?min-1,建立不同产地北柴胡水溶性指纹图谱,通过聚类分析及主成分分析对数据进行分析。结果:北柴胡mat K序列长度为508 bp,34个样本分为8个单倍型,碱基突变率为1.57%,进化树聚类结果,部分甘肃省产北柴胡栽培品与野生品可聚为一类,陕西省及山西省产北柴胡部分栽培品与甘肃省产北柴胡样品聚为一类;皂苷类成分含量研究显示甘肃产北柴胡药材(2年生以上)3种柴胡皂苷含量高于平均值9.8705 mg?g-1,陕西产北柴胡皂苷含量接近均值,而山西产北柴胡皂苷含量低于均值,且具有较大的波动性;在建立的不同产地的北柴胡药材醇溶性指纹图谱中,标定出14个共有峰,样品相似度分析,除S17外,其余样品相似度均高于0.902,聚类分析显示,甘肃产北柴胡药材聚类较集中,主成分分析提取出4种主成分,分别为5号峰SSa,8号峰SSd及两种未知成分10号峰与14号峰。在建立的不同产地北柴胡水溶性指纹图谱中,标定出18个共有峰,样品相似度分析显示,除S17外,其余样品相似度均高于0.905,聚类分析显示,3个省份北柴胡样品,山西省产样品聚类较分散,甘肃省产样品聚类距离较近,主成分分析提取出5种主成分,为11号峰SSb2及4种未知化合物,其中3种分别对应5号峰、13号峰、16号峰。结论:通过对秦岭地区不同产地北柴胡遗传多样性分析,发现不同产地北柴胡样品遗传距离较小,具有较近的亲缘关系,可认为北柴胡植物形态的差异性主要是生长环境的不同导致;通过对北柴胡样品皂苷类成分含量的研究、醇溶性指纹图谱及水溶性指纹图谱研究,发现秦岭地区北柴胡药材以甘肃省产药材皂苷类成分含量较高,质量较稳定,陕西产药材次之,而山西省产北柴胡药材皂苷类含量较低,波动性较大,质量差异性较大。
【学位单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284
【部分图文】：

第一章 秦岭地区北柴胡遗传多样性研究，置于电泳槽中；④点样：移取 1μL 6×Loading Buffer，移取 5 μL DNA溶合均匀后加入点样孔中，另取 5 μL λPst Ι Marker加入点样孔中；⑤电泳：泳仪，调节电压为 150 V，电流为 150 mA，电泳 40 min；⑥紫外检测：成像系统，和观察电泳结果，拍照记录。结果见图 1-1。

matK序列PCR扩增产物Fig.1-2matKsequencePCRamlificationproducts

图 1-3 测序结果Fig.1-3 Sequencing result2.5 数据处理与分析2.5.1 序列拼接对比及序列特点分析利用 DNASTAR软件中的 SeqMAN 进行序列拼接。使用 BioEdit软件进行序列比对，去除低质量序列得到目的基因序列。主要变异位点在 10-20bp、160-210bp、230bp、290-310bp 及 460-470bp 之间，结果见图 1-4。
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马艳芝;王向东;陈桂平;石洪凌;;酵母浸膏对北柴胡种子萌发的影响及评价[J];种子;2017年06期

2 满茹;;识别真假北柴胡[J];开卷有益-求医问药;2019年08期

3 刘冬珠;骆晓寒;龚又明;;人工栽培与野生北柴胡的粉末显微鉴定比较[J];中国中医药现代远程教育;2014年14期

4 陆敏;张绍岩;冯俊霞;宋淑宁;;高效液相色谱法测定北柴胡地下部分黄酮类化合物的含量[J];分析科学学报;2012年02期

5 丁立威;;北柴胡应用价值及市场分析[J];新农业;2009年11期

6 雷燕妮;;北柴胡种子萌发的生物学特性[J];商洛学院学报;2008年02期

7 李忠;王晓丽;;RP-HPLC法测定北柴胡地上部分山柰酚的含量[J];中国野生植物资源;2006年06期

8 谭玲玲,陈莹,蔡霞,胡正海;北柴胡的生物学及化学成分的研究进展[J];中草药;2005年09期

9 李廷利;都晓伟;赵景和;张冬梅;陈彩霞;;南北柴胡药理作用的比较研究——解热和保肝作用的实验研究[J];中医药学报;1992年03期

10 任复平,陈红振,阎永庆;河南嵩县栽培北柴胡经验小结[J];中药通报;1988年02期

相关博士学位论文 前5条

1 谭玲玲;药用柴胡的结构发育与主要药用成分积累关系的研究[D];西北大学;2008年

2 杜士明;鄂西北地区柴胡与北柴胡品质的比较研究[D];湖北中医药大学;2013年

3 谢东浩;春柴胡质量标准化及药效学研究[D];南京中医药大学;2007年

4 王砚;竹叶柴胡和北柴胡品质比较研究[D];成都中医药大学;2014年

5 狄宏晔;补体抑制活性柴胡多糖的制备、纯化与表征[D];复旦大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 徐娇;北柴胡转录因子基因BcAP2-13、BcbZIP134功能研究[D];北京协和医学院;2019年

2 张威;秦岭地区北柴胡遗传多样性及其质量评价研究[D];安徽中医药大学;2019年

3 曹雪;北柴胡及其饮片质量评价的研究[D];长春中医药大学;2019年

4 黄涵签;不同处理对北柴胡种子萌发及愈伤组织诱导的研究[D];吉林农业大学;2018年

5 李英;河北省北柴胡生态适宜性区划研究[D];河北医科大学;2017年

6 董乐萌;北柴胡柴胡皂苷合成相关基因的分子克隆与组织表达分析[D];北京林业大学;2008年

7 杨舸;规范化种植药材的品质评价（Ⅸ）[D];黑龙江中医药大学;2005年

8 王东琴;基于代谢组学的不同基源柴胡功效比较研究[D];山西大学;2013年

9 杨洋;北方常用柴胡类药材的研究[D];北京中医药大学;2007年

10 高可青;晋产优质北柴胡植物学性状比较及RAPD分析[D];山西大学;2012年

本文编号：2856272